加味猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的实验研究

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1、加味猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的实验研究：全世建，李政木，谢桂权，张丽君【关键词】猪苓汤　　摘要：【目的】探讨猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的作用机制。【方法】采用兔抗鼠胸腺细胞抗体(Thy-1)大鼠肾炎模型，检测各组大鼠血液生化指标和细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的活性以及白细胞介素6信使核糖核酸(IL-6?mRNA)的表达波。【结果】模型组的IL-1β、TNF-α和IL-6水平均升高，IL-6?mRNA表达增强，与正常对照组比较有显著性差异(Ｐ＜001)；猪苓汤组能降低IL-1β、

2、TNF-α和IL-6的水平及减弱IL-6?mRNA的表达，与模型组比较均有显著性差异(Ｐ＜005或Ｐ＜001)。【结论】加味猪苓汤可能是通过抑制细胞因子的基因表达、降低细胞因子的活性对原发性系膜增殖性肾炎产生治疗作用。　　关键词：肾小球肾炎，膜增生性/中药疗法；细胞因子类；RNA，信使；加味猪苓汤/治疗作用；疾病模型，动物；大鼠　　猪苓汤出自《伤寒论》，是张仲景为阴虚水热互结证而设。该方虽然只有猪苓、茯苓、泽泻、滑石、阿胶五味药物组成，却能集滋阴、清热、利水三法于一方，立法与处方极为严谨，临床疗效确切。中医研究认为系膜增殖性肾炎的病机多为阴虚湿热互结

3、，该病的病机与猪苓汤证相似［1］，猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎有一定理论依据，并在临床上取得了一定的疗效，为此我们对加味猪苓汤的作用机制进行了研究。　　1材料与方法　　11实验材料　　111药物　　加味猪苓汤(猪苓、茯苓、泽泻、滑石、阿胶、丹参、益母草、白茅根)中生药均购于广州中医药大学第一附属医院，经广州中医药大学鉴定教研室鉴定。饮片洗净后，加水适量，浸泡60?min，煎煮40?min，滤出药液，浓缩成200?g/L备用；肝素注射用剂，购于天津市力生制药厂，批号：980708；卡介苗购于卫生部成都生物制品研究所，批号：980307；完全弗氏佐剂购

4、于广州威佳公司，批号：9007812。　　112动物　　雄性SD大鼠50只，体重150?g左右，购于第一军医大学实验动物中心，合格证号：99A046；雄性新西兰大(NZega公司提供；PCR扩增仪，美国PE2400型；LeicaQ500型图象分析系统；代谢笼由广州中医药大学动物中心提供。　　12造模方法　　采用陈氏Thy-1抗血清制备及系膜增殖性肾炎模型的建立方法［2］，通过分离大鼠胸腺细胞，免疫家兔，制得兔抗大鼠Thy-1抗血清(ATS)，连续4次注射ATS，建立改进型大鼠系膜增殖性肾炎模型。　　121兔抗Thy-1抗血清制备　　大鼠胸腺细胞悬液制

5、备：SD大鼠5只，麻醉后取胸腺，剪碎并挤出胸腺细胞，经尼龙网过滤，除去混杂的组织，滤液即为淋巴细胞悬液；离心，无菌PBS悬浮，计数悬液中淋巴细胞数，调节细胞浓度至1×10１１/L。　　122免疫家兔　　先用卡介苗3?mL在雄性NZin灭活补体，大鼠肝粉吸附，备用。　　123ATS(兔抗大鼠Thy-1抗血清)组织效价测定　　第6周时，从兔耳缘静脉取血2?mL，测定血清抗胸腺细胞抗体的效价。方法如下：分离大鼠胸腺细胞，用生理盐水稀释至1×1010/L，取1滴细胞悬液滴于干净玻片上，体积分数为95%的酒精固定5?min，吹干；将正常兔血清、抗血清原液、及其

6、1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160的稀释液各80?μL滴加在胸腺细胞片上，均匀散开，37?℃孵育40?min后，PBS冲洗(001?mol/L，pH74)；再加抗兔IgG荧光抗体(效价1∶10)，37?℃孵育40?min，PBS冲洗。当效价大于1∶80(即1∶80稀释液仍有较强染色)后将兔放血，离心，血清保存于-4?℃。　　124大鼠Thy-1肾炎模型的制作　　大鼠30只，尾静脉注射ATS，每周1次，连续4周。　　13分组及给药方法　　131分组　　实验大鼠适应性饲养1周后，随机分为4组，即正常对照组、模型组，肝素治疗组，猪苓汤治疗组

7、，每组大鼠10只。　　132给药方法　　正常对照组由尾静脉注射生理盐水10?mL/kg，每周1次，连续4周，同时灌服生理盐水1?g/kg；模型组由尾静脉注射ATS10?mL/kg，每周1次，连续4周，同时每天灌服生理盐水1?g/kg；肝素治疗组由尾静脉注射ATS10?mL/kg，每周1次，连续4周，同时从第1周开始，每天腹腔注射肝素2?mg，连续4周；中药治疗组由尾静脉注射ATS10?mL/kg，每周1次，连续4周，同时从第1周开始，每天灌胃猪苓汤1次(1?g/kg)，连续4周。　　14统计方法　　计量资料方差齐用t检验，方差不齐用t′检验，采用SP

8、SS80统计软件处理。　　血清肌酐(SCr)采用碱性苦味酸法；血尿素氮BUN用乙二肟一硫氨胍法。　　212结