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《加味猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的实验研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、加味猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的实验研究作者：全世建，李政木，谢桂权，张丽才扌【关键词】猪苓汤摘要:【目的】探讨猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的作用机制。【方法】采用兔抗鼠胸腺细胞抗体(Thy-1)大鼠肾炎模型，检测各组大鼠血液生化指标和细胞因子口细胞介素10(儿-10)、肿瘤坏死因子Cl(TNF-C1)、白细胞介素6(TL-6)的活性以及白细胞介素6信使核糖核酸(IL-6?mRNA)的表达波。【结果】模型组的IL-lB、TNF-a和IL-6水平均升高，IL-6?mRNA表达增强，与正常对照组比较有显著性差异(PV001)；
2、猪苓汤组能降低IL-1B、TNF-a和TL-6的水平及减弱IL-6?mRNA的表达，与模型组比较均有显著性差异(PV005或PV001)。【结论】加味猪苓汤可能是通过抑制细胞因子的基因表达、降低细胞因子的活性对原发性系膜增殖性肾炎产生治疗作用。关键词：肾小球肾炎，膜增生性/中药疗法；细胞因子类；RNA,信使；加味猪苓汤/治疗作用；疾病模型，动物；大鼠猪苓汤出自《伤寒论》，是张仲景为阴虚水热互结证而设。该方虽然只有猪苓、茯苓、泽泻、滑石、阿胶五味药物组成，却能集滋阴、清热、利水三法于一方，立法与处方极为严谨，临床疗效确切。中医研究
3、认为系膜增殖性肾炎的病机多为阴虚湿热互结，该病的病机与猪苓汤证相似[1],猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎有一定理论依据,并在临床上取得了一定的疗效，为此我们对加味猪苓汤的作用机制进行了研究。1材料与方法11实验材料111药物加味猪苓汤(猪苓、茯苓、泽泻、滑石、阿胶、丹参、益母草、口茅根)中生药均购于广州中医药大学第一附属医院，经广州中医药大学鉴定教研室鉴定。饮片洗净后，加水适量，浸泡60?min,煎煮40?min,滤出药液，浓缩成200?g/L备用；肝索注射用剂，购于天津市力生制药厂，批号：980708；卡介苗购于卫生部成都生物
4、制品研究所，批号:980307；完全弗氏佐剂购于广州威佳公司，批号:9007812c112动物雄性SD大鼠50只，体重150?g左右，购于第一军医大学实验动物屮心，合格证号：99A046；雄性新西兰大(NZW)白兔5只，购于第一军医大学实验动物中心，合格证号；99A049o113材料血清肌酹试剂盒由北京中生生物工程高技术公司提供，批号：9807170；1111尿素氮试剂盒购于卫生部上海生物制品研究所，批号：T1384-94；白细胞介素1B(IL-1B)放射分析测定盒，批号：RH-73,肿瘤坏死因子a(TNF-a)放射免疫试剂盒,
5、批号：RH-059-50,均由北京北方生物技术研究所提供；白细胞介素6(IL-6)放免药盒，批号：F07,由东亚免疫技术研究所提供；RNA分离试剂盒，批号：25110,反转录试剂盒,批号:189642,均由Promega公司提供;PCR扩增仪,美国PE2400型；LeicaQ500型图象分析系统；代谢笼由广州中医药大学动物中心提供。12造模方法采用陈氏Thy-1抗血清制备及系膜增殖性肾炎模型的建立方法[2],通过分离大鼠胸腺细胞，免疫家兔，制得兔抗大鼠Thy-1抗血清（ATS）,连续4次注射ATS,建立改进型大鼠系膜增殖性肾炎模
6、型。121兔抗Thy-1抗血清制备大鼠胸腺细胞悬液制备：SD大鼠5只，麻醉后取胸腺，剪碎并挤出胸腺细胞，经尼龙网过滤，除去混杂的组织，滤液即为淋巴细胞悬液；离心，无菌PBS悬浮，计数悬液中淋巴细胞数，调节细胞浓度至1X1011/Lo122免疫家兔先用卡介苗3?mL在雄性NZW大白兔背、项、四足掌皮下多点注射进行预致敏，2周后NZW大白兔两侧窝淋巴结肿大，此时在NZW大白兔背部皮下注射抗原（胸腺细胞+完全弗氏佐剂，以等体积的生理盐水和完全弗氏佐剂把胸腺细胞稀释至1Xioi0/L,每只兔注射3X107个细胞。3周后经耳缘静脉注射同样
7、剂量再次免疫家兔，5周后相同途径和剂量进行第3次免疫，第6周测效价，达预定值后颈动脉放血，收集血清，经56?°C,30?min灭活补体，大鼠肝粉吸附，备用。123ATS（兔抗大鼠Thy-1抗血清）组织效价测定第6周时，从兔耳缘静脉取血2?mL,测定血清抗胸腺细胞抗体的效价。方法如下：分离大鼠胸腺细胞，用生理盐水稀释至1X1010/L,取1滴细胞悬液滴于干净玻片上，体积分数为95%的酒精固定5?min,吹干；将正常兔血清、抗血清原液、及其1：10、1:20、1：40、1:80、1:160的稀释液各80?UL滴加在胸腺细胞片上，均匀
8、散开，37?°C孵育40?min后,PBS冲洗(001?mol/L,pH74)；再加抗兔IgG荧光抗体(效价1：10),37?°C孵育40?min,PBS冲洗。当效价大于1:80(即1:80稀释液仍有较强染色)后将兔放血，离心，血清保存于-4?°CO124大鼠T
