活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用

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1、活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用【摘要】目的研究活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用。方法将活性炭加入小牛血清去蛋白提取液中，过滤后检测蛋白含量及吸光度值,呼吸活性及氨基酸的含量。结果与无活性炭对照比较，加入活性炭后小牛血清去蛋白提取液吸光度值、多肽含量均明显下降;呼吸活性及氨基酸含量没有明显变化。结论活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽有吸附作用。【关键词】活性炭;小牛血清去蛋白提取液;多肽TheAbsorptionEffectofActiveCarbononthePolypeptide　　inCalfSerumAbstractProtein-freeLIXin,ethod

2、sPutactivecarbonintocalfserumabstractprotein-free;anddetermineproteincontent,absorbance,aminoacidcontentandbreathnatureafterfiltration.Resultparedinoacidcontentdidnotdecrease.ConclusionsPolypeptideabstractprotein-free;polypeptide　　活性炭是一种多孔径的炭化物，有极丰富的孔隙构造，具有良好的吸附特性，它的吸附作用藉物理及化学的吸咐力而成的,其外观色泽呈黑色。其成份除了主

3、要的炭以外，还包含了少量的氢、氮、氧，其外形似一个六边形，由于不规则的六边形结构，确定了其多体枳及高表面积的特点，每克的活性炭所具有的比表面相当于1000个平方米之多，其吸附容量大、脱附速度快，耐酸、耐碱、耐高温，无毒、无味、无臭;广泛应用于国防、科研、石化、生化、环保、医药、食品、卫生等领域。几乎所有人工合成和生物制药的原料药，尤其是西药都采用活性炭进行脱色精制[1，2]。活性炭吸附的主要作用是去除杂质、提高纯度和去除热源。我公司产品小牛血去蛋白提取液在生产中采用，活性炭脱色，本文研究其在脱色的同时对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用及其对产品质量的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　

4、1.1.1活性炭(上海活性炭厂有限公司);小牛血清去蛋白提取液(奥鸿药业提供)。　　1.1.2药品与试剂血清白蛋白(中国药品生物制品检定所);酚试剂(医学科学院生物制剂中心);碱性铜(奥鸿药业提供)。　　1.1.3仪器UV-1700紫外分光光度计(岛津苏州仪器制造);BP211D电子天平(北京赛多利斯有限责任公司);微孔滤膜过滤器。　　1.1.4高效液相色谱仪　　1.1.5呼吸活性检测仪　　1.2方法　　取小牛血清去蛋白提取液6个批次各1000mL，检测吸光度值、蛋白含量、氨基酸含量及呼吸活性(1组)，分别加入活性炭0.15g，混合均匀后，放置30min，过滤除炭，检测吸光度、蛋白含量、氨基酸

5、含量及呼吸活性(2组)，再分别继续加入活性炭0.15g重复上述操作两次，得(3组)、(4组)。4组数据相比较。　　1.3检测方法　　1.3.1吸光度的测定[3]　　依据紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版附录)，在波长420nm处测定吸光度值。　　1.3.2多肽含量的测定　　标准曲线的制备：精密量取标准蛋白溶液(0.1mg/mL)0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别于试管中，加水至1mL，再分别加碱性铜溶液5mL，混匀于室温放置10min，再加入酚试剂0.5mL摇匀，于室温放置30min，于650nm波长处用空白管调零，测定各管的吸光度值，以蛋白质

6、含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。李鑫，等：活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用辽宁医学院学报2008年8月，29(4)　　样品测定：取本品10倍稀释，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1mL，于试管中，加碱性铜溶液5mL，摇匀于室温放置10min，再加入酚试剂0.5mL摇匀，于室温放置30min，于650nm波长处测定吸光度，从标准曲线中求得样品中蛋白质的含量。　　1.3.3氨基酸含量的测定　　将对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，每次2.5μL，记录色谱图，按内标法以峰面积计算。　　计算公式：　　游离氨基酸含量(mg/mL)=　　(滤样浓度-内标浓度)×58.8内标

7、浓度×1000　　1.3.4采用呼吸检测仪检测各组样品的呼吸活性测定方法如下：　　预先把测压计反应瓶洗净并干燥备用,装好测压液于测压管内，调节液面至150mm。加10%氢氧化钾溶液0.2mL于反应瓶小杯中(为了增加氢氧化钾对二氧化碳的吸收面积，在氢氧化钾溶液中插入一小片滤纸)。反应瓶中先加入磷酸盐缓冲液1.1mL，肝匀浆液1.0mL，然后加供试品0.2mL于反应瓶中。　　由于肝匀浆本身有耗氧作用，