昆明山海棠提取物对移植物抗宿主病小鼠t细胞亚群的影响

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1、昆明山海棠提取物对移植物抗宿主病小鼠T细胞亚群的影响：李晟徐开林李振宇潘秀英【摘要】　　[目的]观察昆明山海棠(THH)提取物对移植物抗宿主病(GVHD)小鼠外周血T细胞亚群(CD+3CD+4、CD+3CD+8)的影响，探讨THH对GVHD的预防作用及机制。[方法]BALB/c受鼠(H2d)清髓性预处理后输注C57BL/6供鼠(H2b)骨髓细胞和脾细胞混合液，随机分4组：模型对照组、环孢素A(CsA)组(剂量为10mg·kg-1·d-1)、THH组(剂量为400mg·kg-1·d-1)、THH+CsA联合用药组(联药组，剂量为TH

2、H100mg·kg-1·d-1+CsA5mg·kg-1·d-1)。观察移植后受鼠GVHD发生及存活情况以及嵌合体植入情况;采用流式细胞术测定受鼠外周血CD+3CD+4、CD+3CD+8T细胞百分率。[结果]①CsA组、THH组、联药组受鼠生存时间均长于模型对照组(P<0.01);②CsA组、THH组、联药组受鼠GVHD临床表现和病理改变均较模型对照组轻;③模型对照组、CsA组、THH组、联药组受鼠骨髓细胞上异基因H2b百分率均>95%;④与模型对照组比较，CsA组、THH组、联药组受鼠移植后外周血CD+3CD+4、CD+

3、3CD+8细胞百分率均下降(P<0.05)，CD+4/CD+8细胞比值均上升(P<0.05)，联药组变化最显著(P<0.05)。[结论]THH可通过调节CD+4/CD+8细胞比值，抑制T淋巴细胞免疫反应而预防小鼠GVHD，THH和CsA小剂量联合用药可能有协同作用。【关键词】昆明山海棠/药理学移植物抗宿主病/中药疗法T细胞亚群/血液皮肤/病理学肝脏/病理学　　异基因造血干细胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation，alloHSCT)是一些血液系统恶性肿瘤的

4、唯一治愈手段，但移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVHD)严重降低了其成功率。GVHD的病理过程表现为于供体的T细胞识别受体抗原而致敏、增殖、分化并分泌多种细胞因子直接或间接攻击受体组织而发生的损伤性改变，CD+4T细胞和CD+8T细胞是参与GVHD的主要效应细胞[1]。临床常用的免疫抑制剂糖皮质激素、环孢素A(cyclosporinA，CsA)等可阻断T淋巴细胞的活化、增殖及应答，但其副作用大、费用高。因此，选择一种较温和的药物，既能减轻GVHD又不致使机体受到过多损伤，是亟待解决的问题。　　昆明山

5、海棠[Tripterygiumhypolaucum(Level)Hutch，THH]是一种免疫抑制中药制剂，已用于多种自身免疫性疾病的治疗，有研究表明[2]其通过抑制T淋巴细胞的功能而发挥免疫抑制效应。本研究将其应用于异基因骨髓移植小鼠模型，观察其对GVHD的预防作用及对外周血CD+3CD+4、CD+3CD+8T细胞的影响，为其进一步临床应用提供实验依据，现报道如下。　　1材料和方法　　1.1动物受鼠为BALB/c小鼠(H2d)，雌性;供鼠为C57BL/6小鼠(H2b)，雄性，均为清洁级近交系小鼠，鼠龄6～8周，体质量18～22g

6、，购自中国科学院上海实验动物中心，合格证号：SCXK(沪)20030003，按二级动物标准运输、饲养。　　1.2药物和试剂CsA(杭州中美华东制药有限公司)溶于无菌生理盐水，配制浓度为1mg/mL;昆明山海棠片(广东博罗先锋药业集团有限公司，主要成分为二萜类和生物碱类，250mg/片)溶于无菌生理盐水，配制浓度分别为40、20、10mg/mL;小鼠抗H2Kb单抗(BD公司);异硫氰酸荧光素CD3(FITCCD3)、藻红蛋白CD4(PECD4)、藻红蛋白CD8(PECD8)单抗(eBioscience公司)。　　1.3G

7、VHD模型复制参照文献[3]方法无菌条件下制备骨髓细胞和脾细胞悬液，均调整细胞浓度为1×108/mL。受鼠移植前行全身照射(TBI)，照射源为60Coγ射线，总剂量8.0Gy，剂量率0.5Gy/min。照射后4h内经尾静脉输入含2×107个骨髓细胞和2×107个脾淋巴细胞的混合细胞悬液，观察GVHD发生情况。　　1.4THH和CsA药物剂量筛选BALB/c受鼠随机分为6组，每组10只。每组受鼠均从移植前1d至移植后30d灌胃给药，每只0.2mL·d-1。模型对照组灌胃生理盐水0.2mL·d-1;THH高、中、低剂量组剂量分别为400、

8、200、100mg·kg-1·d-1;CsA高、低剂量组剂量分别为10、5mg·kg-1·d-1。　　1.5实验动物分组BALB/c受鼠随机分4组，每组20只，每组受鼠均从移植前1d至移植后30d灌胃给药。模型对照组灌胃