甲磺酸胺银杏内酯b冻干粉针的大鼠胚胎胎仔发育毒性和遗传毒性实验研究

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1、甲磺酸胺银杏内酯B冻干粉针的大鼠胚胎胎仔发育毒性和遗传毒性实验研究：蔡鸣　王梦　于飞龙　闫英超【摘要】目的：检测甲磺酸胺银杏内酯B的生殖毒性和遗传毒性。方法：甲磺酸胺银杏内酯B100、50、25mg·kg-1于大鼠妊娠第6～15天连续尾静脉注射给药，观察孕鼠饮水、摄食、生长等一般状况。每周称重2次，妊娠第20天处死孕鼠，记录各项检查结果。采用Ames试验、中国仓鼠肺成纤维细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验观察其遗传毒性。结果：供试品高、中、低剂量用药组母体未出现临床中毒症状。高剂量组和中剂量组吸收胎数、骨骼畸形与溶剂对照组相比有显著差异(P＜0.05)，低剂量

2、组与溶剂对照组相比未见统计学差异。各剂量组胎鼠身长、尾长和体重均未见明显改变(P＞0.05)。高剂量组中未见内脏畸形。供试品在每皿50～5000μg剂量范围内，未观察到回复突变菌落数明显增加。药物终浓度为800、400、200μg·ml-1时，染色体畸变试验结果为阴性。小鼠静脉注射本品260、130和65mg·kg-1剂量，骨髓嗜多染红细胞微核数未见明显增加。结论：在本试验条件下，甲磺酸胺银杏内酯B对大鼠母体一般状况和子代发育均安全的剂量为25mg·kg-1；未见本品有潜在的遗传毒性。【关键词】甲磺酸胺银杏内酯B　胚胎胎仔发育毒性　遗传毒性　大鼠　　甲磺酸胺银

3、杏内酯B冻干粉针的主要成分是甲磺酸胺银杏内酯B（dimethylaminoethylginkgolideBmesylate），化学名称为10O（N，N二甲胺基乙基）银杏内酯B甲磺酸盐。甲磺酸胺银杏内酯B是由银杏内酯B结构修饰而成的抗血小板活化因子的化学药物［15］。其由于水溶性好，故做成冻干粉针，用于缺血性脑血管病急性发作期，已作为一类新药注册申报。为了保证供试品的安全使用，了解有无潜在的致畸作用，我们对其进行了大鼠的胚胎胎仔发育毒性实验研究，同时采用常规遗传毒性试验方法，观察其是否具有潜在的遗传毒性。　1材料与方法　1.1药物　甲磺酸胺银杏内酯B冻

4、干粉针由江苏柯菲平医药有限公司提供，规格为每瓶40mg；批号为061001。实验时用0.9％氯化钠注射液稀释配成所需的受试药液。　1.2动物　SPF级SD大鼠，雌鼠150只（体重210～230g），雄鼠75只（体重255～280g），由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号SCXK(沪)20070003；清洁级ICR小鼠，雄性，6周龄，体重22～26g，合格证号SCXK(苏)20020031，购自南京医科大学实验动物中心。动物房室温控制在20～26℃，相对湿度为40%～70%。所有孕鼠用全价颗粒饲料喂养，动物进入动物室后适应环境1周。组氨酸缺陷型鼠伤寒

5、沙门菌(S.Typhimurium)TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535，上海市疾病预防控制中心提供；中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL），江苏省药品检验所提供。　1.3方法　　1.3.1大鼠胚胎　　胎仔发育毒性试验SD大鼠按雄与雌1∶2合笼，合笼时间5d，对雌鼠的阴道涂片进行显微镜检查，查见精子者定为妊娠0d。将孕鼠随机分为溶剂对照组、环磷酰胺（ＣＰ）阳性对照组以及甲磺酸胺银杏内酯Ｂ高、中、低剂量组，每组20只。各组依次尾静脉注射(iv)5ml·kg-1注射用生理盐水、2.8mg·kg-1注射用ＣＰ和100、50、25mg·kg-1甲磺酸胺银杏

6、内酯B冻干粉针，于妊娠6～15d连续给药，每天iv给药1次，连续给药10d。每天观察孕鼠的摄食、饮水、生长等一般状况，于妊娠0、3、7、10、13、16、20d称取体重。妊娠20d处死孕鼠，记录黄体数、死胎数、着床数、吸收胎数、活胎数以及活胎体重、性别、外观异常等。约1/2胎仔固定于Bouin液作内脏检查，另1/2固定于70%酒精作骨骼畸形检查。　　1.3.2Ames试验　　试验采用TA97、TA98、TA100、TA102、TA15355株菌，标准平皿掺入法，在加S9和不加S9的平行条件下测试。试验浓度依次为每皿5000、2000、500、200、50μg。　

7、　1.3.3CHL染色体畸变试验　　先测定50％生长抑制浓度(IC50)，根据IC50确定试验浓度为800、400、200μg·ml-1。CHL置培养瓶中培养72h后换液，加入受试物。另设溶剂对照、阳性对照和空白对照组。阳性药分别为：-S9即丝裂霉素(MMC，0.4μg·ml-1)和+S9即CP(20μg·ml-1)。加S9组另加0.5mlS9混合物，用1640培养液在37℃培养6h后换液，继续培养18h收获细胞；不加S9组药物接触细胞24和48h后收获细胞。在收获细胞前4h加入秋水仙碱(0.2μg·ml-1)。细胞经甲醇冰醋酸固定，Giemsa染色。每一剂量组

8、观察100个中期分裂相细