不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果

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1、不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果：贾跃伟刘晓萍于业军郭菲菲【摘要】目的研究不同途径骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对小鼠糖尿病治疗效果。方法分离骨髓，贴壁培养并纯化和扩增BMSCs。腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病动物模型。取2×105个第3代BMSCs，对模型鼠分别进行胰腺内多点注射、尾静脉移植以及肾被膜移植。动态观察移植后小鼠的血糖、体质量及行为的变化。结果与糖尿病对照组相比，胰腺移植组、尾静脉移植组和肾被膜移植组小鼠的糖尿病症状有所改善，血糖明显降低(F=32.58～48.35，q=10.06～14.

2、98,P<0.05)，以胰腺移植组血糖下降更为显著。结论3种途径BMSCs移植对小鼠糖尿病均有治疗作用。【关键词】骨髓祖代细胞;骨髓移植;糖尿病;小鼠[ABSTRACT]ObjectiveTostudythetherapeuticeffectsofdifferentice.MethodsMouseBMSCsodelofdiabetesinmiceptomsofthosetreatedprovedandbloodsugardecreased(F=32.58-48.35,q=10.06-14.98,P<0.05

3、),especiallyforthosereceivedBMSCstransplantationinthepancreas.ConclusionAllthethreeentofdiabetesinmice.　　[KEYSCs)取材方便，体外易扩增，不涉及伦理问题，免疫排斥反应轻，具有向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞、胰岛素分泌细胞等多向分化的能力[25]。因此，BMSCs可能成为细胞移植治疗糖尿病的理想的细胞。目前有关干细胞在胰腺内分化的研究，主要采用尾静脉移植、肾被膜移植、肝门静脉移植、胰腺内多点注

4、射进行干细胞移植，其研究侧重于探索干细胞移植后胰腺基因和蛋白的表达，很少进行功能学方面的研究。本实验重点对比研究了胰腺内、尾静脉和肾被膜3种途径进行BMSCs移植对糖尿病的治疗效果。　　1材料和方法　　1.1材料　　取EMLG培养基购自Gibco公司;胎牛血清购自杭州四季青公司;胰蛋白酶购自Sigma公司;链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司。怡成JPS5型血糖仪购自怡成生物电子技术有限公司。　　1.2方法　　1.2.1大鼠BMSCs的分离、培养和标记采用颈椎脱臼法将EMLG培养液反复冲洗骨髓腔。将收获的骨髓制

5、成单细胞悬液。调整细胞密度为1×1010/L，接种于50mL培养瓶中，在37℃、体积分数0.05、饱和湿度的CO2培养箱中培养。24h后换液，除去未贴壁的细胞，每隔3d换液一次。当细胞达到80%融合时传代。在第3代BMSCs培养第3天时加10μL的BrdU溶液(BrdU50mg，二甲基亚砜0.8mL，双蒸水1.2mL)[6]。　　1.2.2糖尿病动物模型的建立取昆明种小鼠25只，雌雄各半，给药前禁食12h，按180mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ[7]。STZ注射前用pH4.5的0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液配制成

6、10g/L的溶液。稳定3d后，随机检测血糖，血糖连续2次大于16.7mmol/L，出现糖尿病症状，说明造模成功。小鼠造模时死亡1只。　　1.2.3干细胞移植将24只糖尿病小鼠分为胰腺移植组、尾静脉移植组、肾被膜移植组及糖尿病对照组，每组6只。取第3代1×109/L的BMSCs，重悬于PBS中，分别于尾静脉、胰腺包膜下、肾被膜下各注射0.2mL干细胞悬液;糖尿病对照组不接受任何处理。小鼠移植后不给予任何抗排斥反应药物，正常摄食和饮水。　　1.2.4移植后血糖的测定采用怡成JPS5型血糖仪，于移植后的第3、7、14、28

7、、42天，采尾静脉血测量血糖。　　1.2.5统计学处理采用PPMS1.5[8]软件进行处理，数据以±s表示，各组间比较行方差分析。　　2结果　　2.1BMSCs的生长情况　　刚分离的骨髓细胞呈圆形，折光性强，大小不一，不能辨认细胞核。接种24h后，可见部分圆形细胞以散在的方式贴壁，贴壁细胞有小的突起。2～3d细胞开始增殖，可见一些分散的集落形成。至14d时，集落中心细胞密集，周围细胞呈放射状或漩涡状排列，细胞之间无接触抑制现象，集落间出现重叠。传代培养的细胞在0.5h后开始贴壁，3～4h后贴壁基本完成，贴壁细胞很快铺展

8、，较原代细胞体积变大，并且不再以集落的方式生长，而是呈均匀分布生长。传至第3代时，细胞形态较为单一，呈长梭形贴壁生长，以平行排列生长为主或呈漩涡状生长。　　2.2糖尿病模型鼠的症状　　腹腔造模后至细胞移植前，有1只小鼠死亡，其余全部存活。造模后3d,小鼠出现多饮、多尿、体质量缓慢下降表现，而且精神萎靡，毛色不顺滑，甚至出现打结现象