不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果_论文

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1、不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果作者：贾跃伟刘晓萍于业军郭菲菲【摘要】目的研究不同途径骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对小鼠糖尿病治疗效果。方法分离骨髓，贴壁培养并纯化和扩增BMSCs。腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病动物模型。取2×105个第3代BMSCs，对模型鼠分别进行胰腺内多点注射、尾静脉移植以及肾被膜移植。动态观察移植后小鼠的血糖、体质量及行为的变化。结果与糖尿病对照组相比，胰腺移植组、尾静脉移植组和肾被膜移植组小鼠的糖尿病症状有所改善，血糖明显降低(F=～，q=～,P【关键词】骨髓祖代细胞;骨髓移植;糖尿病;小鼠

2、[ABSTRACT]ObjectiveTostudythetherapeuticeffectsofdifferentwaysofBMSCstransplantationondiabeticmice.MethodsMouseBMSCswereisolated,culturedandpurified.Amodelofdiabetesinmicewascreatedbyintraperitonealinjectionofstreptozotocin.About2×105BMSCsofthirdgenerationwereinjectedint

3、othepancreas,caudalveinandrenalcapsule.Bloodglucoselevels,body8/8weight,andbehaviorwereobservedaftertransplantationofBMSCs.ResultsComparedwiththecontrolgroup,thediabeticsymptomsofthosetreatedwithBMSCstransplantationimprovedandbloodsugardecreased(F=,q=,P[KEYWORDS]myeloidp

4、rogenitorcells;bonemarrowtransplantation;diabetesmellitus;mice8/8目前，传统治疗糖尿病的方法只能减轻症状，但不能根治，病人一般需要终身治疗，给工作和生活带来了极大的不便。由于给药过程中病人缺乏理想的血糖感应系统，常导致全身性代谢紊乱并继发眼、肾、神经、心血管等重要器官损害。胰岛移植是治愈1型糖尿病最有希望的方法，但是由于供体不足和免疫排斥反应等问题，始终不能广泛应用于临床。干细胞具有极强的自我更新能力及多向分化的潜能，能形成各种组织的早期未分化细胞，是各类疾病细胞治疗和基因

5、治疗的首选种子细胞[1]。骨髓基质干细胞(BMSCs)取材方便，体外易扩增，不涉及伦理问题，免疫排斥反应轻，具有向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞、胰岛素分泌细胞等多向分化的能力[25]。因此，BMSCs可能成为细胞移植治疗糖尿病的理想的细胞来源。目前有关干细胞在胰腺内分化的研究，主要采用尾静脉移植、肾被膜移植、肝门静脉移植、胰腺内多点注射进行干细胞移植，其研究侧重于探索干细胞移植后胰腺基因和蛋白的表达，很少进行功能学方面的研究。本实验重点对比研究了胰腺内、尾静脉和肾被膜3种途径进行BMSCs移植对糖尿病的治疗效果。1材

6、料和方法材料取Wistar大鼠10只，体质量为150～200g;取健康昆明种小鼠25只，2月龄，体质量为35g左右，均来自青岛市药品检验所。DMEMLG培养基购自Gibco公司;胎牛血清购自杭州四季青公司;胰蛋白酶购自Sigma公司;链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司。怡成JPS5型血糖仪购自怡成生物电子技术有限公司。方法大鼠BMSCs的分离、培养和标记采用颈椎脱臼法将Wistar大鼠处死。在无菌条件下分离出双侧胫骨和股骨，用DHanks液清洗干净，除去骨表面附着组织和两端的骨骺端，暴露骨髓腔。用含体积分数胎牛血清的DMEM

7、LG培养液反复冲洗骨髓腔。将收获的骨髓制成单细胞悬液。调整细胞密度为1×1010/L，接种于50mL培养瓶中，在37℃、体积分数、饱和湿度的CO2培养箱中培养。24h后换液，除去未贴壁的细胞，每隔3d换液一次。当细胞达到80%融合时传代。在第3代BMSCs培养第3天时加10μL的BrdU溶液(BrdU50mg，二甲基亚砜mL，双蒸水mL)[6]。8/8糖尿病动物模型的建立取昆明种小鼠25只，雌雄各半，给药前禁食12h，按180mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ[7]。STZ注射前用pH的mmol/L柠檬酸钠缓冲液配制成10g/L的溶液。

8、稳定3d后，随机检测血糖，血糖连续2次大于mmol/L，出现糖尿病症状，说明造模成功。小鼠造模时死亡1只。干细胞移植将24只糖尿病小鼠分为胰腺移植组、尾静脉移植组、肾被膜移植组及糖尿病对照组，每组6只。取第