不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果论文

《不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果论文贾跃伟刘晓萍于业军郭菲菲【摘要】目的研究不同途径骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对小鼠糖尿病治疗效果。方法分离骨髓，贴壁培养并纯化和扩增BMSCs。腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病动物模型。取2×105个第3代BMSCs，对模型鼠分别进行胰腺内多点注射、尾静脉移植以及肾被膜移植。动态观察移植后小鼠的血糖、体质量及行为的变化。结果与糖尿病对照组相比，胰腺移植组、尾静脉移植组和肾被膜移植组小鼠的糖尿病症状有所改善，血糖明显降低(F=32.58～48.35，q=10.06～14.98,P0

2、.05)，以胰腺移植组血糖下降更为显著。结论3种途径BMSCs移植对小鼠糖尿病均有治疗作用。【关键词】骨髓祖代细胞;骨髓移植;糖尿病;小鼠ABSTRACTObjectiveTostudythetherapeuticeffectsofdifferentice.MethodsMouseBMSCsodelofdiabetesinmiceptomsofthosetreatedprovedandbloodsugardecreased(F=32.58-48.35,q=10.06-14.98,P0.05),especiallyforthoser

3、eceivedBMSCstransplantationinthepancreas.ConclusionAllthethreeentofdiabetesinmice.KEYSCs的分离、培养和标记采用颈椎脱臼法将EMLG培养液反复冲洗骨髓腔。将收获的骨髓制成单细胞悬液。调整细胞密度为1×1010/L，接种于50mL培养瓶中，在37℃、体积分数0.05、饱和湿度的CO2培养箱中培养。24h后换液，除去未贴壁的细胞，每隔3d换液一次。当细胞达到80%融合时传代。在第3代BMSCs培养第3天时加10μL的BrdU溶液(BrdU50mg，

4、二甲基亚砜0.8mL，双蒸水1.2mL)6。1.2.2糖尿病动物模型的建立取昆明种小鼠25只，雌雄各半，给药前禁食12h，按180mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ7。STZ注射前用pH4.5的0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液配制成10g/L的溶液。稳定3d后，随机检测血糖，血糖连续2次大于16.7mmol/L，出现糖尿病症状，说明造模成功。小鼠造模时死亡1只。1.2.3干细胞移植将24只糖尿病小鼠分为胰腺移植组、尾静脉移植组、肾被膜移植组及糖尿病对照组，每组6只。取第3代1×109/L的BMSCs，重悬于PBS中，分别于尾静脉、

5、胰腺包膜下、肾被膜下各注射0.2mL干细胞悬液;糖尿病对照组不接受任何处理。小鼠移植后不给予任何抗排斥反应药物，正常摄食和饮水。1.2.4移植后血糖的测定采用怡成JPS5型血糖仪，于移植后的第3、7、14、28、42天，采尾静脉血测量血糖。1.2.5统计学处理采用PPMS1.58软件进行处理，数据以±s表示，各组间比较行方差分析。2结果2.1BMSCs的生长情况刚分离的骨髓细胞呈圆形，折光性强，大小不一，不能辨认细胞核。接种24h后，可见部分圆形细胞以散在的方式贴壁，贴壁细胞有小的突起。2～3d细胞开始增殖，可见一些分散的集落形

6、成。至14d时，集落中心细胞密集，周围细胞呈放射状或漩涡状排列，细胞之间无接触抑制现象，集落间出现重叠。传代培养的细胞在0.5h后开始贴壁，3～4h后贴壁基本完成，贴壁细胞很快铺展，较原代细胞体积变大，并且不再以集落的方式生长，而是呈均匀分布生长。传至第3代时，细胞形态较为单一，呈长梭形贴壁生长，以平行排列生长为主或呈漩涡状生长。2.2糖尿病模型鼠的症状腹腔造模后至细胞移植前，有1只小鼠死亡，其余全部存活。造模后3d,小鼠出现多饮、多尿、体质量缓慢下降表现，而且精神萎靡，毛色不顺滑，甚至出现打结现象。2.3小鼠造模前后体质量的变化

7、小鼠造模前的平均体质量为(33.60±2.99)g，造模后的平均体质量为(31.60±2.79)g，移植后的平均体质量为(33.80±2.49)g，各组小鼠的体质量变化无统计学意义。2.4不同移植途径对小鼠血糖水平的影响尾静脉移植组、肾被膜移植组、胰腺移植组与糖尿病对照组相比较，血糖都有所降低(F=32.58～48.35，q=10.06～14.98,P0.05)，以胰腺移植组血糖下降更为显著。见表1。表1BMSCs移植前后各组血糖水平3讨论胰岛移植是治愈1型糖尿病最有希望的方法，但是由于供体不足和免疫排斥反应等问题，始终不能广泛应

8、用于临床。BMSCs具有向多种细胞系转化的潜能。正常情况下，BMSCs大多处于休眠状态，在病理状态或外因诱导下可表现出不同程度的再生和更新能力，不仅可分化为造血组织，还可以向多种造血以外的组织迁移、定位，并分化为相应的组织细胞9。最新研究表明，骨髓