银翘散的高效液相色谱指纹图谱研究

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1、银翘散的高效液相色谱指纹图谱研究【关键词】银翘散；,,指纹图谱；,,高效液相色谱　　摘要：目的建立银翘散的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。方法采用梯度洗脱法对银翘散进行HPLC测定，流动相为0.05％磷酸-甲醇梯度洗脱，流速为0.8ml・min-1，检测波长为279nm。结果运用梯度洗脱能较好的分离银翘散水煎提取物的主要成分；经方法学考察，HPLC指纹图谱具有良好的重现性：10个不同地区的样品中18个特征指纹峰有专属性。结论建立的银翘散HPLC指纹图谱分析法为银翘散及其制剂的质量的评价奠定了基础。　　关键词：银翘散；指纹图谱；高效液相色谱　　Abstract:Objec

2、tiveToestablishtheHPLC-FPCofYinQiaosan.MethodsThegradientelutionethanoland-0.05％phoshoricacid,theflol・min-1,andthedetection.ResultsTheconstituentsofYinQiaosanplesethodhadagoodrepeatabilityandthe18monpeakshadanexclusiveproperties.ConclusionThemethoddevelopedcansupplythefoundationforthequal

3、ityevaluationofYinQiaosanandrelativesubstanceconveniently.　　Keyatographyc;HPLC　　银翘散是治疗风热感冒的常用方，由金银花、连翘、薄荷、桔梗、牛蒡子、淡竹叶、荆芥、淡豆豉、甘草组成。具有辛凉解表、清热解毒的功效。笔者从7个省10个城市不同药店购买了银翘散。这些不同地区药材组方的HPLC指纹图谱是否包括有银翘散成分群信息的存在，并能通过这些信息，了解其内在质量，并为动物体内实验提供充分依据。对此我们进行了实验研究。　　1仪器与材料　　1.1仪器与试剂DionexP680型高效液相色谱仪（德国戴安），Tcc-100

4、柱温箱，UVD-170U紫外检测器，MettlerToledoAT20型分析天平（十万分之一），所用试剂均为分析纯。　　1.2药材来源银翘散复方购于山西大同(1)、山东潍坊(2)、山西临汾(3)、陕西西安(4)、湖北随州(5)、湖北武汉(6)、湖南湘潭(7)、广东江门(8)、山东莱芜(9)、河南郑州（10），绿原酸（110753-200212）、原儿茶酸、牛蒡子苷（110819-200404）、连翘苷（110821-200406）均购于中国药品生物制品检验所。　　2方法　　2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇（A）-0.05%磷酸

5、（B）0~10min甲醇由10％升到20％,10~30min甲醇由20％升到35％,30~50min甲醇由35％升到37％,50~80min甲醇由37％升到50％；流速0.8ml・min-1；检测波长279nm；柱温30℃；分析时间80min。　　2.2供试品的制备取金银花10g，连翘10g，薄荷6g，桔梗6g，牛蒡子6g，淡竹叶4g，荆芥4g，淡豆豉5g，甘草5g，加10倍量的水，回流提取1h，倾出煎液，药渣再加入8倍量的水提取30min，合并煎液，浓缩成相当于生药量1g・ml-1的溶液后加入乙醇配成70%的乙醇液，过夜，滤过，回收乙醇，移置100ml量瓶

6、中用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液，从储备液中吸取2ml，用甲醇定容到10ml，经0.2μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。　　2.3对照品的制备精密称取原儿茶酸、绿原酸、牛蒡子苷、连翘苷适量，用甲醇溶解，并稀释成一定浓度的各对照品溶液。　　2.4指纹图谱及技术参数　　2.4.1指纹图谱的制备精密吸取10批银翘散供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件操作，考察120min供试品溶液的色谱分离情况，记录80min色谱图。即得。结果见图1。　　图110个地区的银翘散指纹图谱叠加图（略）　　2.4.2共有指纹峰的标定根据10批银翘散供试品的检测结果，比较其色谱图。以相对保留时间

7、标定其共有指纹峰18个，以4号峰为参照峰（S），计算各共有峰相对保留时间，结果RSD均小于3%。结果见表1。　　2.4.3共有指纹峰面积的比值根据10批银翘散供试品的色谱图结果，以参照峰的峰面积为1，计算各共有指纹峰面积与参照峰面积的比值及平均比值。结果见表2。　　2.4.4非共有峰峰面积的比值计算非共有峰占总面积的比值，结果表明，其比值小于10%，符合指纹图谱的要求。结果见表3。　　表1共有峰相对保留时间（略）　　表2共有峰相对面积（略）