银翘散的高效液相色谱指纹图谱研究论文

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1、银翘散的高效液相色谱指纹图谱研究论文【关键词】银翘散；,,.freellmin-1，检测波长为279nm。结果运用梯度洗脱能较好的分离银翘散水煎提取物的主要成分；经方法学考察，HPLC指纹图谱具有良好的重现性：10个不同地区的样品中18个特征指纹峰有专属性。结论建立的银翘散HPLC指纹图谱分析法为银翘散及其制剂的质量的评价奠定了基础。关键词：银翘散；指纹图谱；高效液相色谱Abstract:ObjectiveToestablishtheHPLC-FPCofYinQiaosan.MethodsThegradientelutionethanol

2、and-0.05％phoshoricacid,theflolmin-1,andthedetection.ResultsTheconstituentsofYinQiaosanplesethodhadagoodrepeatabilityandthe18monpeakshadanexclusiveproperties.ConclusionThemethoddevelopedcansupplythefoundationforthequalityevaluationofYinQiaosanandrelativesubstanceconvenient

3、ly.Keyatographyc;HPLC银翘散是治疗风热感冒的常用方，由金银花、连翘、薄荷、桔梗、牛蒡子、淡竹叶、荆芥、淡豆豉、甘草组成。具有辛凉解表、清热解毒的功效。笔者从7个省10个城市不同药店购买了银翘散。这些不同地区药材组方的HPLC指纹图谱是否包括有银翘散成分群信息的存在，并能通过这些信息，了解其内在质量.freelasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇（A）-0.05%磷酸（B）0~10min甲醇由10％升到20％,10~30min甲醇由20％升到35％,30~50min甲醇由35％升到37％,50~

4、80min甲醇由37％升到50％；流速0.8mlmin-1；检测波长279nm；柱温30℃；分析时间80min。2.2供试品的制备取金银花10g，连翘10g，薄荷6g，桔梗6g，牛蒡子6g，淡竹叶4g，荆芥4g，淡豆豉5g，甘草5g，加10倍量的水，回流提取1h，倾出煎液，药渣再加入8倍量的水提取30min，合并煎液，浓缩成相当于生药量1gml-1的溶液后加入乙醇配成70%的乙醇液，过夜，滤过，回收乙醇，移置100ml量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液，从储备液中吸取2ml，用甲醇定容到10ml，经0.2μm微孔滤膜滤过，作为供试品

5、溶液。2.3对照品的制备精密称取原儿茶酸、绿原酸、牛蒡子苷、连翘苷适量，用甲醇溶解，并稀释成一定浓度的各对照品溶液。2.4指纹图谱及技术参数2.4.1指纹图谱的制备精密吸取10批银翘散供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件操作，考察120min供试品溶液的色谱分离情况，记录80min色谱图。即得。结果见图1。图110个地区的银翘散指纹图谱叠加图（略）2.4.2共有指纹峰的标定根据10批银翘散供试品的检测结果，比较其色谱图。以相对保留时间标定其共有指纹峰18个，以4号峰为参照峰（S），计算各共有峰相对保留时间，结果RSD均小于

6、3%。结果见表1。2.4.3共有指纹峰面积的比值根据10批银翘散供试品的色谱图结果，以参照峰的峰面积为1，计算各共有指纹峰面积与参照峰面积的比值及平均比值。结果见表2。2.4.4非共有峰峰面积的比值计算非共有峰占总面积的比值，结果表明，其比值小于10%，符合指纹图谱的要求。结果见表3。表1共有峰相对保留时间（略）表2共有峰相对面积（略）表3非共有峰总面积所占比例（略）2.4.5共有峰的归属精密吸取原儿茶酸、绿原酸、牛蒡子苷、连翘苷分别进样，对照相对保留时间可知，指纹谱中2号峰为原儿茶酸，3号峰为绿原酸，16号峰为牛蒡子苷，17号峰为连翘苷

7、。见图2。图2银翘散中成分分析及峰指认（略）2.5方法学考察为了考察分析方法的可靠性，以样品5为例，对仪器的精密度、方法重现性以及稳定性做了相应的考察。2.5.1精密度实验取同一供试品溶液，连续进样6次，其共有峰保留时间RSD均小于3%，峰面积占总峰面积10%以上的共有峰峰面积的RSD不超过10%，表明进样的精密度良好。见表4~5。2.5.2重复性实验取5号银翘散配方5份，分别按供试品溶液制备方法制备，分别进样，检测指纹峰，其共有峰相对保留时间的RSD小于3%，10以上的共有峰峰面积的RSD不超过10%，表明进样的重复性良好。结果见表6~

8、7。表4精密度及稳定性实验（相对保留时间）共有峰（略）表5精密度及稳定性实验（相对峰面积）共有峰（略）2.5.3稳定性实验由于样品每次进样需要运行时间接近2h，故精密度实验和稳定性实验可以同时