cmyc、cfos mrna及相关蛋白在糖尿病大鼠心肌细胞中表达的研究

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1、cmyc、cfosmRNA及相关蛋白在糖尿病大鼠心肌细胞中表达的研究：纪征尚小明张燕杨秀兰李燕李霞【摘要】目的观察2型糖尿病状态下大鼠心肌细胞中cmyc、cfosmRNA及相关蛋白的变化。方法50只雄性SD大鼠随机分为对照组（15只）和糖尿病组（35只）。对照组喂养标准饲料，糖尿病组喂养高脂饲料。喂养8g/kg，血糖＞7.8mmol/L为糖尿病大鼠模型，继续用高脂饲料喂养6yc、cfosmRNA变化，用（美国强生公司），低温高速离心机HITACHI20PR52D（日本东芝公司），HM315组织切片机（德国ICRODPHOTFXA（日

2、本Nikon公司）。链脲佐菌素（STZ，德国SERVA公司），RT试剂盒（Fermentas公司），PCR试剂盒（Promega公司）。　　1.2.2模型制备参照文献〔4～6〕方法建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型。两组大鼠饲养8g/kg，注射72h后尾静脉采血，测定禁食6h后的空腹血糖，血糖＞7.8mmol/L为2型糖尿病大鼠模型，继续用高脂饲料喂养6TM血糖/血酮仪按常规快速测定仪检测0、30、60、120min血糖。FINS采用竞争性放射免疫分析法测定，放射性125I胰岛素同样品中的胰岛素抗体竞争反应，按常规操作进行。正葡萄糖钳夹实验测定胰

3、岛素敏感性，记录稳态下连续120min的葡萄糖输注速率。取稳态下6次葡萄糖输注速率的平均值作为稳态葡萄糖输注速率〔GIR，mg/(kg·min)〕，反映机体对胰岛素的敏感性。参照文献〔7，8〕方法，依据公式〔IRI=(FBG×FINS)/22.5〕计算IRI值。　　1.2.4cmyc、cfosmRNA表达的测定14l/kg乌拉坦腹腔注射麻醉，迅速打开胸腔取出心脏，剪去血管和心脏周围结缔组织，用4℃预冷生理盐水冲洗，立即置于液氮中，分装后-80℃冻存，用于提取总RNA。用Trizol法提取总RNA，应用上海生工生物工程公司的PCR引物：cmyc

4、（GenBank：AY679730）：上游：5′CTTCCCCTACCCGCTCAACGAC3′，下游：5′CACATCAATTTCTTCCTCATCA3′，扩增产物长度为208bp；cfos(GenBank:X06769)：上游：5′CTTCCTTTGTCTTCACCTACCC3′，下游：5′GGCTCACATGCTACTAACTACC3′，扩增产物长度为439bp；GAPDH(GenBank:AF106860)：上游：5′ACATCATCCCTGCATCCACT3′，下游：5′GGGAGTTGCTGTTGAAGTCA3′，扩增产物长度为

5、650bp。以GAPDH作为内参照，以RTPCR方法检测cmyc、cfosmRNA的相对表达量。　　1.2.5cmyc、cfos蛋白的测定应用蛋白质提取液提取心肌组织中的总蛋白，以βactin作为内参照，采用yc、cfos蛋白的变化。　　1.3统计学处理所有数据均用x±s表示，采用SPSS13.0软件进行统计学处理分析，对所测定结果进行正态性及方差齐性检验，组间比较用单因素方差分析检验。　　2.2体重及FINS、FPG、ISI水平见表1～表5。8yc、cfosmRNA的表达见图1～图3。以GAPDH作为内参照，cmycmRNA的相

6、对表达量在208bp处可见明显条带，密度扫描对照组为0.3909±0.1129，糖尿病组为0.3816±0.0448，两组无显著性差异。cfosmRNA的相对表达量在439bp处可见明显条带，密度扫描对照组为0.5096±0.1254，糖尿病组为0.3952±0.0674，组间比较有统计学差异（P＜0.05）。　　图128s和18sRNA的RTPCR分析（略）　　图2RTPCR14ycmRNA的变化（略）　　图3RTPCR14RNA的变化（略）　　图4Cs）的氧化还原反应转录因子（核因子κВ）和AP1，并增加MAPKs、细胞外信号调节蛋

7、白（ERK）、p38MAPK的活性。GSA能够明显刺激VSMCs的增殖和迁移，引起血管壁炎症介导因子的产生，导致VSMCs的增殖和迁移〔12〕。因此，糖尿病心肌病变自始至终存在着基因水平的表达异常，尤其是心肌细胞凋亡，细胞凋亡是由基因调控的主动死亡过程，具有独特的形态结构、生化和细胞分子生物学特征，在糖尿病心肌病变和心脏重构过程中起重要作用，是多基因多因素影响的结果。但目前糖尿病心肌病变中，cmyc、cfosmRNA及蛋白在糖尿病心肌中的表达的报道较少。肿瘤坏死因子α（TNFα）激活MAPK，使bax表达上调，bcl2表达下调，引起细胞凋亡；

8、TNFα促进cfos、cmyc表达，使心肌产生收缩功能不良的胚胎型同工蛋白，心肌间质胶原纤维沉积和心肌间质纤维化。