以基因芯片技术研究马齿苋多糖对糖尿病模型小鼠胰岛基因表达的影响

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1、以基因芯片技术研究马齿苋多糖对糖尿病模型小鼠胰岛基因表达的影响作者：周春丽，李玉萍，刘建涛，胡娜，刘华，苏虎【摘要】目的探讨马齿苋多糖（PPS）对糖尿病小鼠预防作用的分子机制。方法应用基因芯片技术比较PPS处理组和生理盐水对照组糖尿病小鼠的基因表达差异。结果PPS组上调基因1条，下调基因1条，上调基因和糖尿病的发生有关，下调基因和氧化还原法应相关。结论马齿苋多糖能预防或延缓糖尿病小鼠糖尿病的发生。【关键词】马齿苋多糖；糖尿病；基因芯片　　Abstract：ObjectiveToinvestigatethemolecularmechan

2、ismunderlyingthepreventiveeffectofPortulaceoleraceapolysaccharideondiabetesmellitusinmice.MethodsInordertoexplorethegeneexpressionprofilesofPortulaceoleraceapolysaccharidemice'sisletcellstreatedicroarraytechniqueellitus,1genedoellitusinmice.　　Keyellitus,DM)是一组由遗传和环境因素相互

3、作用而引起的体内糖、蛋白质及脂肪代谢紊乱,以持续高血糖和伴发多种并发症为特征的一种临床综合征。主要分为1型(胰岛素依赖型糖尿病,insulin-dependentdiabetesmellitus,IDDM)和2型(胰岛素非依赖型糖尿病,non-insulin-dependentdiabetesmellitus,NIIDM)。1型糖尿病是一种在遗传基础上由环境因素触发的慢性自身免疫性疾病，以胰岛β细胞特异性损伤，不能合成和分泌胰岛素为特征；2型糖尿病是因胰岛素分泌相对不足或外周组织的胰岛素抵抗所致，占成人患者的95%以上［1，2］。虽然

4、目前对糖尿病发病机理的认识还不十分清楚，但多年来许多学者的研究结果表明无论是1型还是2型糖尿病都存在功能性胰岛β细胞的缺失现象，并伴有相同的并发症，同时，针对相关调控基因人们也在研发大量新药。然而，迄今为止,除胰岛移植治疗外治疗糖尿病药物多为单一效应，只能控制血糖，并不能防止高血糖累积肾脏、神经、视网膜、心血管等所致的糖尿病慢性并发症（diabeticchronicplications,DCC）的发生，包括失明、心脑血管疾病、肾功能衰竭、神经病变等。马齿苋多糖（PortulacaoleraceaL.polysaccharide,PPS

5、)是马齿苋的主要有效成分［3］，具有提高人体免疫力、防治癌症、抗氧化、抗衰老等作用［4～6］。用PPS预处理小鼠可以明显降低糖尿病模型小鼠的血糖和改善其糖耐受量异常，且与PPS浓度和时间成正相关性［7］。本研究运用基因芯片技术，观察PPS对糖尿病模型小鼠胰岛基因表达的影响。　　1材料与仪器　　1.1原料　　新鲜马齿苋PortulacaoleraceaL.于2005-09购于江西南昌市农贸市场，经本校药学院药理学教研室鉴定。用清水洗净，沥干水分，80℃鼓风干燥6h，粉碎备用。准确称取马齿苋粉末50g，按照1∶30(idiKit购自Oua

6、gen公司。　　HeraeusT12高温烘箱，SORVALLEvolutionRC型离心机，旋转蒸发仪(RE-52AA)，Philipsfort粉碎机，生物芯片研制系统。　　2方法　　2.1mRNA提取　　2.1.1用一步法分别抽提20只小鼠总RNA具体步骤：①取100mg新鲜胰腺组织置1.5ml离心管中，加入1mlTrizol充分匀浆，室温静置5min；②加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min；③4℃离心，12000g离心15min，取上清液；④加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min；⑤4℃离心，1200

7、0g离心10min，弃上清液；⑥加入1ml75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g离心5min，弃上清液；⑦晾干，加入适量的DEPCH2O溶解（65℃促溶10～15min）。　　2.1.2从总RNA中分离mRNA①取上述提取的总RNA若干（少于0.25mg）到一个新的无RNase的EP管中，用无RNase的水定容到250μl；②加入BufferOBB250μl,OligotexSuspension15μl。用Tip打匀或用手弹匀；③70℃水浴，3min（裂解RNA的二级结构）；④20～30℃条件下，静置10min（让Oligotex

8、与mRNA结合）；⑤高速离心2min，小心吸走上清液（该上清液要保留），留下约50μl的上清液在原管里；⑥用BufferOLM（激光共聚焦）扫描芯片，用ImaGene3.0软件分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值。