新型人转录因子hbklf对k562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究

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1、新型人转录因子hBKLF对K562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究作者：王茫桔　马晓芸　石永进　武淑兰　贺福初【摘要】　　孕22周的胎肝是胎儿的主要造血器官，其中含有大量与造血相关的调控因子。人碱性Krüppel样因子(humanbasicKrüppel-likefactor,hBKLF)是本研究室从这一时期胎肝cDNA文库中新克隆的转录因子。对其C端的结构分析发现，它含有3个特征性C2H2锌指结构，因此属于KLF转录因子家族。前期的表达谱研究工作显示，hBKLF在成人外周血白细胞、骨髓和胎肝中表达量高，在红系中有表达，这提示它可能与造

2、血相关。本研究以K562细胞为模型，研究hBKLF与造血细胞增殖、分化及血红蛋白合成的关系。构建hBKLF正义及反义真核表达载体，转染K562细胞，经G418筛选4周，得到稳定细胞株；用RT-PCR、TT法比较增殖速率的变化；用甲基纤维素半固体培养法比较集落形成率的差别；用苯息丁法观察氯高铁血红素（hemin）诱导K562细胞分化后血红蛋白合成水平的差异。结果表明：正义质粒和反义质粒经NcoI酶切鉴定构建正确。转染正义质粒的K562细胞（正义组）中hBKLF的mRNA及蛋白质表达水平增加，转染反义质粒的K562细胞（反义组）中hBKLF的mR

3、NA水平降低。增殖活性在反义组、正义组、对照组分别为1.335±0.022、1.067±0.010、1.118±0.014，反义组K562细胞的增殖速率加快，正义组细胞增殖速率减慢（P<0.001）。细胞形态在各组间无明显区别。集落形成率在反义组、正义组、对照组分别为148±13、136±10、141±10，各组间无显著差异（P>0.05）。3组细胞血红蛋白合成水平在hemin诱导后均升高，诱导后血红蛋白升高倍数在对照组、反义组、正义组分别为9.064±1.637、14.360±2.185、4.820±0.404，反义组K562细

4、胞合成血红蛋白能力增加，正义组合成血红蛋白能力下降（P<0.05）。结论：hBKLF可以抑制K562细胞的增殖，对血红蛋白合成有负调控作用，但未观察到hBKLF对细胞形态及克隆形成率的影响。【关键词】hBKLF血红蛋白;K562;细胞增殖;细胞分化　　EffectoftheNeanTranscriptionFactorhBKLFontheProlifera-tion,DifferentiationofK562CellLineandHemoglobinSynthesis　　DepartmentofHematology,PekingUniv

5、ersityFirstHospital,BEijing100034,China;1DepartmentofGenomicsandProteomics,InstituteofRadiationMedicine,AcademyofMilitaryMedicalSciences,ChineseNationalHumanGenomeCenteratBEIjing,Beijing100850,ChinaAbstractThehumanbasicKrüppel-likefactor（hBKLF）isaneantranscriptionfactorfrom

6、thecDNAlibraryoffetalliver.ItbelongstotheKrüppel-liketranscriptionfactorfamily.Previousexpressionstudyshoatopoieticrelatedfactor.ThisstudyedtoinvestigatetheeffectofhBKLFoncellproliferation,differentiationandhemoglobinsynthesisbyusingK562celllineasmodel.Thesenseandantisensee

7、xpressionplasmidsofhBKLFine.AfterG418selectionfor4ationandhemoglobinproductionethod,methylcellulosesemisolidculturemethodandbenzidinetestrespectively.Themorphologicchangeofcellicroscope.TheresultsshoidcouldincreasehBKLFlevelandantisenseplasmidcoulddecreasehBKLFexpression.10

8、9大肠杆菌、pcDNA3.1/myc-hisC质粒为我室保存。V高效逆转录试剂盒均购自Promega公司。小牛血清、胎牛血清购自Hyclone公司。RPMI1640