提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究

《提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究【摘要】以白色链霉菌SLF2110为产生菌，着重从菌种选育和补料工艺两方面研究提高白色链霉菌的盐霉素产量。结果表明，①氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的突变株盐霉素发酵产量有很大提高；②在基础培养基中减少豆油加量，采用中间补豆油控制，发酵水平与没有补料的相比有较大提高。【关键词】盐霉素；白色链霉菌；发酵工艺　　Studyontheimprovementoffermentationprocess　foryieldofsalinomycinABSTRACTThestudyreferstotheimprovementoffermentationproces

2、sforincreasingtheyieldofsalinomycin.UsingStreptomycesalbusSLF2110astheproducingstrain,theyieldofthefermentationcanbeincreasedlargelyethodofmutagenesisinducedbyUVandLiClandtheoptimizationofthebeanoilfeedingforsalinomycinfermentationprocess.　　KEYgSO41.2，碳酸钙5，食盐3，消沫剂1。pH6.5～7.0。　　发酵培养基2(补豆油工艺)(g/L)硫

3、酸铵5，黄豆粉30，豆油50，KH2PO41，MgSO41.2，碳酸钙5，食盐3，消沫剂1。pH6.5～7.0。　　效价测定培养基(%)蛋白胨0.3，酵母粉0.3，葡萄糖0.1，琼脂粉1.4。pH6.8～7.0。　　1.3实验规模　　摇瓶种子250ml三角瓶内装25ml培养基，接入成熟斜面孢子，33℃于摇床培养70h左右，转速220r/min。　　种子培养20L种子罐装12L培养基，接入摇瓶种子，接种量120ml，罐温35℃，罐压0.05Mpa，搅拌转速500r/min，通气比为1∶0.5vvm，培养30h左右。　　发酵培养50L发酵罐装培养基30L，从种子罐取种3L接入，罐温33℃，罐压0

4、.05Mpa，搅拌转速400r/min，通气比为1∶0.5vvm，中途采用补加豆油工艺与不补料工艺两种方式，12d放罐，测定放罐液效价。　　1.4测定方法　　还原糖测定斐林试剂法。　　氨基氮测定甲醛法。　　盐霉素效价测定以杯碟法测定，检定菌为短小芽孢杆菌。　　豆油和脂肪酸的测定按　　2结果与分析　　2.1自然分离　　供试菌株SLF2110的单孢子悬液，经自然分离，从中获得一株新菌株lNSLF2110作为出发菌株，效价49118u/ml，较SLF2110提高18%(41588u/ml)。　　2.2氯化锂处理　　(1)氯化锂敏感度以lNSLF2110为出发菌株，用不同剂量的氯

5、化锂处理，其敏感度结果见表1。　　(2)突变菌株的菌落形态以lNSLF2110为出发菌株，经氯化锂处理后培养，形成的菌落形态有3种类型，3种菌落类型的菌株中分别挑出代表性菌株进行斜面培养，过筛，观察诱变后的变异率。其中圆帽状型(类型Ⅲ)的正变率为最高。结果见表2。　　(3)氯化锂与紫外线复合处理以lNSLF2110为出发菌株，分别采用①氯化锂前处理与紫外线复合处理和②氯化锂后处理与紫外线复合处理，考察其诱变效应，同时以不经过诱变处理的各稀释浓度的单孢子悬浮液涂于空白平板作为对照，结果见表3。　　表3结果表明，先用氯化锂前处理后再与紫外线复合处理对菌株的诱变效应较氯化锂后处理更好，

6、正　　表1不同剂量氯化锂对出发菌株的敏感度　略　　表2三种典型菌落的菌株诱变后的变异率情况　略　　表3氯化锂与紫外线复合处理的诱变效应　略　　(4)筛选结果比较以lNSLF2110为出发菌株，经单一的氯化锂处理后筛选出的正变率高氯Ⅳ突变株和经氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的正变率高氯UVⅩ突变株，与1NSLF2110菌株进行对比试验，筛选结果见表4。结果表明，经氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的突变株氯UVⅩ发酵水平最高，比原出发菌株提高54%，脂肪酶的活力比原出发菌株提高近两倍。　　2.3补豆油工艺　　盐霉素的合成途径为聚多酮途径，起始单位是三碳单位丙二酰C

7、oA。以植物油或动物油作为培养基碳源能提供更多的三碳和二碳单位，有利于盐霉素的合成。葡萄糖作碳源时，尽管也可以转化为短链脂肪酸参与盐霉素的生物合成，但大部分进入TCA循环而被作为能源。　　豆油是盐霉素发酵的优良碳源，一方面豆油能为初级代谢提供碳骨架和能量，另一方面能为盐霉素的合成提供前提物质，促进盐霉素的合成。由于豆油对发酵液溶氧影响非常大，而且过量的豆油会吸附在菌丝体上，严重影响菌体生长和代谢，采用减少培养