褐黄孢链霉菌生产纳他霉素研究论文

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1、摘要摘要纳他霉素(Natamycin)属于二十六元多烯大环内酯类抗生素，是一种高效、广谱的抗真菌剂。由于纳他霉素对哺乳动物细胞的毒性极低，现己在食品、医疗等领域得到广泛应用。但目前国内外纳他霉素发酵的水平较低，且成本较高，应用前景受到很大限制。因此，有必要对纳他霉素的发酵进行深入的研究和开发。本文围绕如何提高纳他霉素的产量和质量，对生产菌种的选育、纳他霉素的发酵工艺和产品纯化等方面进行了研究，具体内容如下：以褐黄孢链霉菌ArCC13326为出发菌株进行摇瓶发酵，其纳他霉素的发酵产量为2_68dE。经琼

2、脂块法筛选获得一株高产菌株(54号)，其摇瓶发酵产量为2．95g／L，将该菌株进行链霉素抗性筛选，最终选育出一株高产纳他霉素的突变株N．24。该菌株在未优化条件下的纳他霉素摇瓶发酵产量为3．52dE，比54号出发菌株的发酵产量提高了19．3％。经验证，菌株N-24的遗传性能十分稳定。接着考察了种龄、接种量、发酵培养基初始prI、温度、装液量及添加前体等对褐黄孢链霉菌N-24摇瓶发酵合成纳他霉素的影响。经优化确定最适培养条件为：接种时间为40"-'44h，接种量为100／5，初始pH73，温度28℃，装

3、液量为30mL／300mL，转速200rpm，培养时间为120h，在发酵24h时加入O．6％的丙酸钠。该条件下菌株N．24摇瓶发酵生产纳他霉素的产量可达到6．87dE，比其未优化条件下的产量(3．52dE)提高了95．2％。以菌株N-24为生产菌株，进行了lOL发酵罐放大研究。发酵罐中的纳他霉素产量可达8．34dE，比摇瓶发酵产量(6．87g／L)提高了21．4％。以10L发酵罐发酵的实验条件为依据，进行了50L发酵罐放大研究，其产量为8．0dE。此外，本论文还对纳他霉素的提取工艺进行了初步研究。确定

4、的最佳提取条件为：加入6倍质量于干菌丝的75％乙醇，pH1l，37℃萃取5h。二次提取后萃取液中纳他霉素提取收率为90．4％。萃取液经过活性炭脱色后，将pH值调整至5．5"5．7之间，在10℃结晶24h，其结晶率达到80％，最终纳他霉素收率达到70％左右。成品中纳他霉素的含量为90．2％。关键词：褐黄孢链霉菌：纳他霉素；菌种选育；发酵：优化：提取英文摘要AbstractNatamycinisoneofthekindsofmacrolideantibioticswith26一memberedringpo

5、lyenestructure．Natamycinispredominantlyastrong,broad—spectrumantifungalagent．However,theyieldofnatamycinatpresentisverylow,SOtheapplicationofnatamycinislimitedseverelyduetothehighCOStofproduction．Therefore，itisofgreatimportancetoenhancethereseamhanddeve

6、lopmentofproductionprocess．Inthiswork,ahighnatamycinproductionstrainwasselectedandmutatedfornatamycinproduction．ThemediumcompositionandfermentationconditionswereoptimizedandtheseparationtechnologyofnatamycinWaSdeveloped．Themajorresearchcomentsandresults

7、are舔follows．StreptomycesgilvosporeusATCC13326WaSusedasastartingstrain．AstrainNo．54withhighnatamycinproductionwasscreenedoutbyKirby—Bauermethod，andtheconcentrationofnatamycinreached2．95g／Linshakeflaskculture．AmutantstrainN一24withhighernatamycinproduction

8、wasselectedafterthestrainNo．54wastreatedwithstreptomycin．Inshakeflaskcultivationanatamycinconcentrationof3．52g／Lwasachievedunderthesamecultivationconditions，whichwasapproximately1．19timeshigherthanthatcouldbeobtainedbythestrainNo