正交实验法优选当归补血汤提取工艺的研究

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1、正交实验法优选当归补血汤提取工艺的研究【摘要】目的优选当归补血汤的最佳提取工艺条件。方法以当归补血汤中阿魏酸含量为指标,对影响提取的重要因素A提取时间，B加水量，C提取次数进行L9(34)正交实验设计。结果最佳提取工艺为药材加12倍量水，提取两次，提取2h/次。结论优选得到的提取工艺稳定可行。【关键词】当归补血汤阿魏酸正交实验　　Abstract：ObjectiveTostudythebestextractionprocessofTangkuEiBlood-supplementingdecoction.M

2、ethodsUsingtheorthogonaldesignountofes,extractedhour)and3levelstodeterminethecontentofferulicacidastheindexofevaluation.ResultsTheoptimumconditionsfortheextractionofferulicacidesofelasted2hours.ConclusionTheextractionprocessforferulicacidfromTangkuEIBlood

3、-supplementingdecoctionentingdecoction;Ferulicacid;Orthogonaldesign当归补血汤出自李东垣《内外伤辨惑论》。该方由当归、黄芪两味药按1∶5的比例组成，是经典的气血双补名方，主治劳倦内伤、气弱血虚、阳浮外越、妇人经行、产后血虚发热头痛，以及疮疡溃后久不愈合等症。阿魏酸是中药当归中的主要有效成分之一，也是当归补血汤中的主要药效物质。现代药理学研究表明，阿魏酸具有抗氧化、增加冠脉血流量、抗血小板聚集等作用，临床上可用于治疗动脉粥样硬化，预防脑血栓形

4、成［1］。本实验采用传统的水煎煮提取方式，取影响水煎煮提取的主要因素即加水量、煎煮时间、煎煮次数3个因素，各取3个水平进行L9（34）正交实验。以当归补血汤中的主要药效物质阿魏酸含量为指标，筛选当归补血汤的最佳提取工艺。　　1器材　　1.1仪器美国戴安Summit高效液相色谱仪系列（P680型四元低压梯度泵，UVD170U型紫外检测器，CHROMELEON6.60色谱工作站）；旋转蒸发仪RE52-99（上海亚荣生化仪器厂）；TDL80-2B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；BP211D电子分析天平（德国s

5、artorius公司）。　　1.2药品与试剂阿魏酸标准品，购自中国药品生物制品检定所，批号：0773-9910；黄芪（产地内蒙古）、当归（产地甘肃）饮片均购自南京市药业股份有限公司。甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），纯净水，其余试剂均为分析纯。　　2方法　　2.1正交实验设计根据传统汤剂的提取方法以及药材所含成分的理化性质的需要,选定提取时间、加水量、提取次数作为考察因素，以阿魏酸含量为指标，应用L9（34）正交实验设计进行实验，因素水平安排见表1。表1因素水平（略）　　2.2样品溶液的制备称取当归5g,黄

6、芪25g，共9份,按L9（34）正交实验表各列所示条件提取，滤过，合并滤液，于旋转蒸发仪上减压浓缩，所得浓缩液置100ml的棕色容量瓶内，加入冰醋酸0.5ml，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，定容，即得样品溶液。　　2.3阿魏酸含量测定方法　　2.3.1色谱条件色谱柱：KromasilC18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇0.5％冰醋酸水溶液（35∶65）；流速：0.8ml/min；检测波长：322nm；柱温：40℃。　　2.3.2标准曲线的绘制取干燥恒重的阿魏酸对照品适量，精密称定，加水溶解

7、，稀释制成不同浓度溶液，各精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为y=8.7963x+1.0913，r=0.9994。结果表明在2.908～23.264μg/ml范围内阿魏酸的浓度与峰面积呈良好的线性关系。　　2.3.3样品溶液的预处理及测定采用甲醇沉淀法，取样品溶液10ml，置50ml棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度；精密吸取定容后溶液10ml，3000r/min离心10min；取上清液，0.22μm微孔滤膜滤过，精密吸取20μl

8、注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2。表2正交实验结果（略）　　2.3.4回收率实验采用加样回收法，取已知阿魏酸浓度（10.768μg/ml）的样品溶液5份，分别加入精密称定的适量阿魏酸对照品，测定，结果平均回收率为97.63％，RSD为2.27％。　　2.3.5精密度实验取浓度为13.456μg/ml对照品溶液，按含量测定项下方法，重复测定6次，记录峰面积值，结果RSD为0.85％，表明本法精密度良好。　　2.3.6稳定性