src激酶在脊髓背角长时程增强的诱导和维持中的作用

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1、Src激酶在脊髓背角长时程增强的诱导和维持中的作用【关键词】Src激酶；长时程增强(LTP)；脊髓背角；痛觉过敏　　ABSTRACT:ObjectiveToevaluatetheroleofSrckinaseintheinductionandmaintenanceofspinallongtermpotentiation(LTP).MethodsTheCfiberevokedfieldpotentialsbarenlargement.Results①Genistein(200μmol/L)orPP2(100μmol/L),aselectiveSrckinase

2、inhibitor,pletelyblockedLTPinductioninisteredat30minpriortotetanicstimulation.②GenisteinorPP2reversedspinalLTPinatimedependentmanner.At15minafterLTPinduction,Genistein(200μmol/L)orPP2(100μmol/L)reversedLTPpletely.At30minafterLTPinduction,hoeconcentrationofGenisteinorPP2didnotaffectt

3、hespinalLTP.ConclusionActivationofSrckinaseinspinaldorsalhornmaybecrucialfortheinductionandearlyphasemaintenanceofLTPofCfiberevokedfieldpotentials.　　KEYSO;Sigma)，均配制为40mmoL/L的储存液，在临用前用9g/LNaCl溶液分别稀释成200μmol/L(Genistein或Genistin)与100μmol/L(PP2)的工作液。工作液中DMSO的终浓度不超过7.0mmoL/L。将15g/L的琼脂

4、(溶解于153.8mmoL/LNaCl溶液)加热使其完全液化后，冷却至38℃，倾倒于暴露的脊髓表面，在其上方挖一个小井，便于在脊髓表面给予药物。　　1.3电生理记录和神经刺激　　脊髓背角C纤维诱发电位的记录方法如文献[56]所述。用钨丝微电极(电阻0.5～1MΩ)进行细胞外记录，电极深度在脊髓表面下(100～500)μm。用数/模转换器(DT2821F16SE)以10kHz速度处理和储存数据。以C纤维诱发电位的面积作为参数。单方波(10～20V，0.5ms，1min)刺激分离的左侧坐骨神经以诱发脊髓C纤维诱发电位，强直刺激(40V，0.5ms，100

5、Hz，持续1s，间隔10s，4次)诱导C纤维诱发电位LTP。坐骨神经的刺激点到脊髓背角记录点的距离约11cm。实验结束时给予过量戊巴比妥钠处死大鼠。　　1.4统计学处理　　所有数据以C纤维诱发电位面积的均数±标准误表示，均数间差异的显著性检验组内用SO，为排除DMSO本身可能影响C纤维诱发电位或基本的突触传递，在脊髓表面给予与工作液同样剂量的DMSO。在整个实验记录过程中，7.0mmoL/LDMSO并不影响C纤维诱发电位，并且该浓度的DMSO并不影响脊髓背角LTP的诱导和维持(资料未显示)。为排除Genistein抑制脊髓LTP是通过药物的非特异性效应而

6、不是直接抑制Src激酶的活性这种可能性，观察了Genistein的非活性类似物Genistin对脊髓LTP诱导的影响，发现强制刺激前30min给予Genistin，仍可诱导出脊髓背角C纤维LTP(P<0.05，n=6，图1C)。　　诱导出LTP30min后，记录节段脊髓表面加入Genitein(200μmol/L)并不能影响脊髓LTP。在给药前C反应面积为(200.8±10.1)%，与用药后至少3hC反应面积比较无统计学差异(P>0.05,n=6,图2B)。　　为排除药物对脊髓LTP维持的非特异性作用，观察了另一Src激酶的高特异性阻断剂PP2

7、对业已建立的LTP的影响。给予PP2100μmol/L，药物作用40min后C反应面积由(212.2±10.2)%降至(182.9±10.2)%(P<0.05,n=7,DA受体，并与NMDA受体一起免疫共沉淀，Src的抑制剂能阻断或抑制海马LTP的诱导，直接激活突触后神经元的Src可增强兴奋性突触后反应[78]。Src的激活对于海马LTP的诱导是必需的[3]，Src诱导的AMPA受体EPSCs是Ca2+依赖性的，而NMDAREPSCs是非Ca2+依赖性的[9]。本文结果表明Genistein或PP2能够阻断脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导，说明Sr

8、c激酶的活性增强在LTP