src激酶在脊髓背角长时程增强的诱导和维持中的作用

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1、Src激酶在脊髓背角长时程增强的诱导和维持中的作用【摘要】　　目的探讨Src激酶在大鼠脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。方法细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C纤维诱发电位。结果①Src激酶的选择性抑制剂Genistein(200μmol/L)或PP2(100μmol/L)对脊髓背角C纤维诱发电位的基础电位没有影响，但可阻断脊髓背角LTP的诱导。②Genistein或PP2呈时间依赖性逆转脊髓背角LTP。在LTP诱导后15min，脊髓局部给予Genistein(200μmol/L)或PP2(100μmol/L)可完全逆转LTP。但是

2、，同样浓度的Genistein或PP2在LTP诱导后30min，均不能逆转业已建立的LTP。结论脊髓背角Src激酶的激活参与C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持。【关键词】Src激酶；长时程增强(LTP)；脊髓背角；痛觉过敏　　ABSTRACT:ObjectiveToevaluatetheroleofSrckinaseintheinductionandmaintenanceofspinallongtermpotentiation(LTP).MethodsTheCfiberevokedfieldpotentialswererecordedatthesuperficiallay

3、ersofspinaldorsalhornatthelumbarenlargement.Results①Genistein(200μmol/L)orPP2(100μmol/L),aselectiveSrckinaseinhibitor,completelyblockedLTPinductionwhenadministeredat30minpriorto9tetanicstimulation.②GenisteinorPP2reversedspinalLTPinatimedependentmanner.At15minafterLTPinduction,Genistein(200μm

4、ol/L)orPP2(100μmol/L)reversedLTPcompletely.At30minafterLTPinduction,however,thesameconcentrationofGenisteinorPP2didnotaffectthespinalLTP.ConclusionActivationofSrckinaseinspinaldorsalhornmaybecrucialfortheinductionandearlyphasemaintenanceofLTPofCfiberevokedfieldpotentials.　　KEYWORDS:Srckinas

5、e;longtermpotentiation(LTP);spinaldorsalhorn;hyperalgesia　　海马长时程增强(longtermpotentiation,LTP)是学习、记忆的神经基础。LTP也存在于脊髓背角，电刺激C纤维及自然伤害性刺激或急性神经损伤可使脊髓背角C纤维诱发电位产生LTP。脊髓背角C纤维诱发电位的LTP介导病理性疼痛，脊髓背角LTP意味着痛觉可在脊髓背角形成记忆[12]。已有研究表明，Src的激活对于海马LTP的诱导是必需的[3]。有证据表明，Src的表达和磷酸化参与了伤害性刺激引起的中枢敏感化的形成[4]，但Src在脊髓背角突触传

6、递可塑性变化中的作用还不清楚。为阐明Src激酶在脊髓背角LTP的诱导和维持中的作用，本研究应用Src激酶的抑制剂Genistein与PP2，在LTP诱导前、后，直接局部作用于脊髓节段表面，观察其对C9纤维诱发电位LTP的影响。　　1材料与方法　　1.1实验动物及准备　　采用SD雄性大鼠250～280g。体重230～280g。乌拉坦(1.4g/kg，ip.)麻醉。行常规气管插管和颈外静脉插管。在胸13～腰1(T13～L1)行椎板切除术，暴露脊髓腰膨大。游离左侧坐骨神经，使用双极氯化银电极刺激坐骨神经。颈外动脉插管持续监测动脉血压，其波动范围为10.67～13.33kPa(80～1

7、00mmHg)。用热反馈系统使大鼠直肠温度维持在37～37.5℃。　　1.2主要试剂　　Genistein(Sigma)、Genistin(Sigma)与PP2(Calbiochem)首先分别溶解于二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO;Sigma)，均配制为40mmoL/L的储存液，在临用前用9g/LNaCl溶液分别稀释成200μmol/L(Genistein或Genistin)与100μmol/L(PP2)的工作液。工作液中DMSO的终浓度不超过7.0mmoL