通络益智散对拟血管性痴呆大鼠脑组织中glu和gaba影响的实验研究

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1、通络益智散对拟血管性痴呆大鼠脑组织中Glu和GABA影响的实验研究　摘要：目的：探讨通络益智散对拟血管性痴呆大鼠海马区兴奋性和抑制性氨基酸的影响。方法：选用改良的脑缺血再灌注配合腹腔注射硝普钠降压法复制血管性痴呆模型。将实验大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、尼莫地平组、通络益智散大剂量组、通络益智散小剂量组。给药3周后，取海马匀浆检测谷氨酸（Glu）含量，并观察海马区γ-氨基丁酸（GABA）的表达。结果：通络益智散可以显著降低拟血管性痴呆模型大鼠海马区Glu的含量、增强GABA的表达（P<0.01）。结论:通络益智散能够通过调节血管性痴呆大鼠海

2、马区Glu和GABA的含量保护脑组织，这可能是其治疗血管性痴呆的作用机制之一。　　关键词：血管性痴呆;谷氨酸；γ-氨基丁酸　　血管性痴呆(VascularDementia,VD)是由各种脑血管病所导致的痴呆综合征。属于中医“呆病”、“文痴”、“健忘”等范畴。在我国由于脑血管病的多发,使得VD成为高发疾病之一。目前国内外对控制本病病程进展尚无有效方法和药物，但根据现在的研究结论认为VD具有潜在的可防治性，其部分是可逆的[1]。本研究通过观察通络益智散对拟血管性痴呆大鼠GABA表达及Glu含量的影响，进一步阐明通络益智散对血管性痴呆的作用机制，为缺血再灌流后

3、所致血管性痴呆的治疗提供实验依据。　　1实验材料　　1.1实验动物　　健康9月龄g/支）用双蒸水配成1mg/L溶液，黑纸包裹备用；尼莫地平(山西亚宝药业集团有限公司生产，批号041003，20mg/片，实验时用生理盐水配成1mg/mL的混悬液)；通络益智散由红芪、当归、地龙、红花、桃仁、葛根、核桃仁、石菖蒲、远志组成，将其水煎3次，合并浓缩为含生药3.14g/mL的药液，高压灭菌，4℃贮存备用。Glu及总蛋白测试盒购自南京建成生物工程研究所，批号为20041207；SABC试剂盒和兔抗大鼠GABA由武汉博士德生物工程有限公司生产。　　1.3仪器　　HAN

4、GPING电子称:上海精科公司天平仪器厂生产，型号JY4001；可控低温冰箱:青岛澳柯玛，型号BCD-183；H.H.S21-4电热恒温水浴锅，上海医疗器械五厂生产；VIS-7220紫外分光光度计，北京第二光学仪器厂生产；LXJ-64-01高速光学仪器离心机，北京医疗仪器修理厂生产。　　2实验方法　　2.1模型制备　　采用王蕊等[2]的改进方法，将大鼠用3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉后，仰卧固定在手术台上，常规消毒，颈正中切口，分离双侧颈总动脉（moncaroAidarAeris，CCA），在夹闭双侧CCA之前，腹腔注射硝普钠（2.5mg/kg

5、），随即用无创伤动脉夹夹闭双侧CCA10min，共夹闭2次，每次间隔10min，即采用2次缺血10min、再灌10min的方式。再通后伤口滴青霉素适量，缝合伤口，放回笼中，(27±0.5)℃温度下饲养。在全部造模过程中用肛表密切测量大鼠肛温，保持肛温在37℃左右，以防止低温对脑缺血损伤的保护作用。　　2.2动物分组及处理　　从60只大鼠中随机选出10只作为假手术组，假手术组只进行麻醉，颈正中切口，分离双侧颈总动脉，但不阻断CCA及腹腔注射硝普钠。其余50只造模，手术过程由于损伤喉返神经、出血过多、麻醉过量，死亡6只大鼠，术后两天相继死亡4只，余40只大鼠

6、随机分为模型组、通络益智散大剂量组、通络益智散小剂量组、尼莫地平对照组，每组10只。所有大鼠从造模后第7d开始给药，1日1次。假手术组与模型组予生理盐水；通络益智散大剂量相当于正常成人用量的20倍（浓度为3.14g/mL）；通络益智散小剂量相当于正常成人用量的5倍（浓度为0.785g/mL）；尼莫地平组给予尼莫地平悬浊液（相当于正常成人用量的20倍），给药剂量均为0.01mL/g，连续给药21d。　　2.3标本采集和处理　　治疗结束后第28d，迅速开胸暴露心脏，从左心室插入导管至主动脉，于右心耳部剪一小口，用生理盐水快速冲洗，直到右心房流出液清亮为止。洗

7、毕将大鼠快速断头取脑，在冰盘上去除脑膜和血管，分离海马称重，放入玻璃匀浆器加9倍生理盐水，在冰浴中匀浆，3000r/min离心机离心10min，取上清液予－20℃冰箱内冻存待测。右半脑置于4%多聚甲醛及0.1mol/L磷酸缓冲液中固定72h后，取海马常规脱水，石蜡包埋，冠状连续切片（4μm），40℃水温展片，明胶处理的载玻片捞片后置于60℃的烤箱内烤2～3h。　　2.4Glu的检测　　依据试剂盒说明书步骤，用7220分光光度计进行检测。　　2.5GABA的检测　　（1）对石蜡切片进行免疫组织化学反应。①脱蜡。②滴加0.03%H2O2的甲醇溶液(室温)30

8、min以去除内源性过氧化物酶，然后蒸馏水洗3次。③热源修复抗原：将切片浸入0.0