x线照射对实验性癫痫大鼠脑皮层gaba和gabaa受体的影响论文

《x线照射对实验性癫痫大鼠脑皮层gaba和gabaa受体的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、X线照射对实验性癫痫大鼠脑皮层GABA和GABAA受体的影响论文陈家玉，梁树立，曾啸雄【摘要】目的探讨癫痫大鼠放射治疗中γ-氨基丁酸(GABA)及其受体的作用机制并选择合理放射剂量。方法利用慢性点燃癫痫大鼠对照组、放射1组、放射3组进行0、24、6Gy的X线放射，对放射2组、放射4组和放射5组行12Gy的X线放射，每组10只，对照组和放射1组、放射3组于放射后1h断头取脑，放射4组于放射后1天、放射5组于放射后1周进行断头取脑，并观察放射5组其放射后癫痫发作情况.freelicalkindlingratmodelofepilepsyeasuredbyaminoacidana

2、lyzer,andGABAAreceptorchangesmunohistochemicalstaininginfrontallobeofthebrainofratsinallgroups.Seizureofratingroup5seizureafterradiotherapy.Ingroup1,thequantityofGABAightbeattributabletorapidandsustainedchangeinGABAandGABAAreceptors,and12Gyappearedtobetheappropriateirradiationdoseforepilep

3、ticrat.Keyma-aminobutyricacid，GABA)占有主导地位，本研究旨在通过观察X线照射对大鼠皮层内GABA和GABAA型受体(GABAAtypereceptor，GABAAR)α1亚单位含量的影响，探讨放射治疗癫痫的有效性及其可能的作用途径。1资料与方法1.1实验动物与分组清洁级SD(SpragueDaa公司、液体DAB酶显色试剂盒和酶标抗兔多聚复合物购自福建迈清公司，混合氨基酸标准液购自日本味之素公司、日立#2622-SC树脂氨基酸分析柱、日立L-8500氨基酸分析仪。1.3癫痫模型建立［1］所有大鼠均每日上午9：00～10：00时给予PTZ35m

4、g/kg腹腔注射，连续1个月，注射后观察20min，癫痫发作分级标准参照Racine的方法。放射前所有大鼠及放射4、5组取样前1h均进行腹腔注射PTZ，放射5组在放射治疗后第4天再进行腹腔注射PTZ1次。1.4放射治疗用氯胺酮与速眠新（2∶1）混合液腹腔注射（0.8mg/kg）对所有大鼠进行麻醉，麻醉后1h内利用垂直X线对大鼠头部进行放射，放射1组剂量为24Gy，放射2、4、5组均为12Gy，放射3组剂量为6Gy，对照组剂量为0Gy。1.5组织标本采集［2］1～3组照射后1h内进行断头取脑，放射4组照射后24h进行取脑，放射5组照射后1周进行断头取脑，取出大脑后用滤纸吸去血

5、液，脑组织置于胶片包裹的冰面上。1.6组织匀浆和GABA含量分析取下左侧额叶组织150mg放入匀浆管中并加入1.5ml磺基水杨酸，匀浆管置于0℃水中利用超声匀浆器破碎，在4℃低温高速离心机（15000r/min）离心15min，取上清液0.5ml，置于-81℃低温冰箱保存，1周内完成氨基酸含量分析。将样品融化后，用针头式滤器（0.45μl）过滤样品，在日立氨基酸分析仪上进行GABA测定，进样量为10μl，缓冲液流速0.4ml/min。1.7病理切片和免疫组织化学分析取0.5cm×0.5cm大小右侧额叶组织，石腊包埋4μm胶片(APES+丙酮)切片，常规脱蜡至水，0.3%过氧

6、化氢溶液封闭处理10min，PBS溶液冲洗3次，微波抗原热修复10min，PBS液冲洗3次。然后分别加入一抗抗GABAARα1亚单位抗体（1∶200稀释），室温1h孵育，PBS液冲洗3次，然后加入二抗酶标抗兔多聚复合物30min，PBS液冲3次，DAB加过氧化氢混合液显色，5min后水冲洗，苏木素复染细胞核，酒精梯度脱水，二甲苯透明后中型树胶封片，镜检分析。阳性细胞率为在10个高倍镜（10×40倍）时同一视野内阳性细胞数/同类细胞总数。1.8统计学分析用SPSS10.0统计软件进行统计分析，测定数据用（±s）表示，样本间按成组资料进行方差分析（F检验），然后进行Q检验组间比

7、较。2结果2.1癫痫模型的建立及生存情况大鼠出现Racine3级以上发作在开始注射后的7～25天开始，至1个月时所有大鼠均在停药3天后重新注射PTZ可以出现3级以上发作，主要表现为双上肢阵挛、坐起、全身抽搐、跳起阵挛等症状。放射4、5组X线治疗大鼠在麻醉后3h恢复正常活动与饮食，无死亡，观察过程中未记录到癫痫发作情况。2.2不同剂量X线放射后GABA含量的测定对氨基酸分析试测定放射1、2、3组与对照组间的GABA含量变化情况见表1。其中放射1、2组较对照组GABA含量高差异均有显著性。表1不同放射剂量GABA含量及