鼠曲草中黄酮类化合物的微波辅助提取研究

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1、鼠曲草中黄酮类化合物的微波辅助提取研究作者：王世宽潘明郭春晓刘璐【关键词】鼠曲草；,,黄酮类物质；,,微波辅助提取　　摘要：目的应用微波法提取鼠曲草中的黄酮类化合物。方法采用单因素实验正交实验,研究了乙醇体积分数、料液比、微波作用时间、微波功率对鼠曲草黄酮提取量的影响规律。结果微波提取法的最佳工艺条件为微波作用时间5min，乙醇体积分数15%，料液比1∶60(g/ml），微波功率700icroaffineD.Don别名：佛耳草、清明菜，系菊花科鼠曲草属植物。本草原名“鼠耳”始载于《名医别录》《本草拾遗

2、》称：“鼠曲草，生平岗熟地，高尺余，叶有白毛，黄花”，已收载于《中国药典》1977年版Ⅰ部中［1］。据测定，鼠曲草全草含5%黄酮苷，黄酮类化合物具有抗氧化、抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、保肝作用，保护心脑血管系统和抗病毒以及杀虫等广泛的生理活性，且毒性较低，还可以用作食品、化妆品的天然添加剂，如甜味剂、抗氧化剂、食用色素等［2，3］。近年来，微波因促进反应的高效性和强选择性，及其操作简便，副产物少，产率高及产物易提纯等优点，已经被广泛应用于生化蛋白质水解和有机合成、酯化等反应。国外不少学者已将微

3、波应用于天然产物的浸提过程。研究表明，微波技术应用与天然产物的提取具有选择性高、操作时间短、溶剂耗量少、有效成分得率高的特点［4，5］。本实验采用微波法提取鼠曲草黄酮类物质，以黄酮类物质的提取率为指标，研究了乙醇体积分数、料液比、微波作用时间、微波功率对黄酮类物质提取率的影响规律，并采用正交实验法确定了最佳提取条件。　　1材料与方法　　1.1材料与设备鼠曲草：采自四川理工学院汇南校区校园内；芦丁为生化试剂，购于北京化学试剂公司产品；其他试剂均为分析纯，购于成都科龙华工试剂厂KD23BDE型美的微波炉、

4、TGL16B型Anke离心机、721E型Spectrum可见分光光度计、GZXDH・300BSⅡ电热恒温干燥箱。　　1.2方法　　1.2.1索氏提取精确称取干燥的鼠曲草粉末样品(2.0000±0.0002）g放入索氏提取器中，在蒸馏瓶中加入200ml60%乙醇，水浴回流8h。提取液转移至250ml容量瓶中，用提取溶剂定容至250ml，取样测定。　　1.2.2鼠曲草中黄酮类化合物的微波辅助提取工艺流程：新鲜鼠曲草→预处理→按一定料液比加溶剂浸润→微波处理→抽滤→黄酮粗提液→定容→取样测定。

5、操作要点：采摘新鲜鼠曲草，去掉根部及枯败部分，清洗沥干后，干燥，粉碎备用。准确称取一定量的鼠曲草粉末，加入一定量一定浓度的乙醇溶液作萃取剂进行微波处理，粗提液抽滤30min，用60%乙醇定容至100ml，取样测定。　　1.2.3实验方案设计考察乙醇体积分数、料液比、时间、微波功率对鼠曲草黄酮类物质提取效果的影响。在单因素试验基础上，以微波功率，乙醇体积分数、提取时间、料液比为试验因素，选用L9(34)正交表进行正交试验，确定最佳提取工艺条件。　　1.3分析方法　　1.3.1标准溶液的配制与标准曲线的绘

6、制［6，7］精密称取芦丁10mg(120℃烘至恒重)，以80%的乙醇定容至5ml,再加蒸馏水稀释至10ml。得到浓度为1.0mg/ml芦丁标准液。准确吸取0,0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml芦丁溶液于10ml具塞刻度试管中,先加5%NaNO2溶液0.3ml,摇匀放置6min后,加入10%的Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀放置6min，最后加1mol/mlNaOH溶液4.0ml，用60%乙醇定容至刻度,摇匀后放置15min，在510nm下测定吸光度，参比为60%乙醇，得标准曲线(芦丁浓度y

7、和吸光值A的关系)如图1所示，其回归方程：Y=0.076X+0.0002，r=0.9997。　　图1标准曲线（略）　　1.3.2鼠曲草总黄酮的测定及计算将定容后的粗体液以6000r/min离心18min，提取液冷却，取上清液0.3ml，按1.3.1的方法进行测定。按下式进行计算总黄酮提取率。总黄酮提取率（%）=m1/(m×V1/V2×1000)×100%m1=检测样品相当于标准芦丁的黄酮含量,mgm=样品质量,gV1=检测样品稀释液体积，mlV2=样品稀释液总体积，ml　　2结果与分析　　2.1乙醇体

8、积分数对鼠曲草总黄酮提取的影响在微波炉功率500l)，微波作用时间3min的条件下，不同乙醇体积分数对鼠曲草总黄酮提取率的影响规律见图2。　　图2乙醇体积分数对鼠曲草总黄酮提取的影响（略）　　由图2可以看出，在微波作用下，黄酮的提取率随乙醇体积分数的增加而提高。当乙醇体积分数增加到一定值时提取率反而降低，这是因为高体积分数的乙醇沸点较低，易挥发，部分黄酮也随着蒸气被带出。　　2.2料液比对鼠曲草黄酮提取量的影响在微波炉功率500in的条件下，不同料液比对