研究颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性

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1、研究颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性【摘要】目的：利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂1（FPSA1）的细胞毒性进行评价.方法：采用MTT法评价FPSA1的细胞毒性.利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加500，750mL/LFPSA1浸提液,于加样后2，4，7d用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490nm值,计算相对增殖率,对FPSA1的细胞毒性进行评价.结果：随着时间推移,不同浓度的FPSA1浸提液对L929细胞增殖均无明显作

2、用(P>0.05),各浓度FPSA1浸提液加样后2，4，7d之间差异无统计学意义(P>0.05),提示L929细胞增殖与浸提液浓度无明显相关性,FPSA1的细胞毒性分级为1级.结论:FPSA1无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种有发展前景的颜面赝复体粘接材料.【关键词】颜面部缺损；赝复体粘接剂；细胞毒性；MTT法　　0引言　　颜面赝复体的固位中组织倒凹和机械固位多用作辅助方式,种植体固位虽然是颜面赝复体首选的固位方式［1］,但由于多种原因使患者不能接受种植手术时,就需依

3、赖粘接固位.传统的赝复体粘接剂中,聚丙烯酸酯类粘接剂价廉,粘接强度尚可,但皮肤上的粘接剂残留较难去除［2］；有机硅类粘接剂粘接强度高,皮肤残留少,但含有机溶剂具有潜在刺激性［3］.我们通过乳液聚合的方法合成有机硅改性聚丙烯酸酯类的颜面赝复体粘接剂1（facialprosthesisskinadhesive1,FPSA1）,并参照国际标准化组织发布的医疗器械生物学评价标准,进行体外细胞毒性试验［4］,将小鼠肺成纤维细胞(L929)在离体状态下进行培养,以探讨FPSA1浸提液对L929

4、细胞生物学活性的影响,评价其生物的相容性.　　1材料和方法　　1.1材料FPSA1(第四军医大学口腔医学院与西北工业大学联合研制)；无菌滤纸,高压蒸汽灭菌后备用.L929细胞株（第四军医大学基础部免疫学教研室）；DMEM培养液(美国Gibco公司)；含100mL/L的标准胎牛血清(FBS,杭州四季青公司)；100kU/L氨苄青霉素、100kU/L硫酸链霉素,pH=7.2～7.4；胰蛋白酶,四甲基偶氮唑盐(MTT)(美国Sigma公司)；四甲基偶氮唑盐溶液,实验前用磷酸盐缓冲液(PBS)新鲜配

5、制,浓度为5g/L,过滤除菌后4℃避光保存,1any)；25cm2细胞培养瓶,96孔细胞培养板(NUNC,丹麦).　　1.2方法　　1.2.1浸提液制备将无菌滤纸裁成1cm×1cm试样备用,按每面涂50μL的粘接剂使滤纸浸渍均匀,清洁空气轻吹2～3min,待粘接剂由白色乳液变至无色透明胶膜,依照ISO1099312样品制备要求［5］,试样按表面积与浸提介质比6cm2/mL加入含100mL/LFBS的DMEM培养液中,另将未涂粘接剂的无菌滤纸作为阴性对照按同样比例浸于相同培养液,放置在37℃，5

6、0mL/LCO2培养箱内浸提72h,分别得到1000mL/LFPSA1浸提液和阴性对照组浸提液,过滤除菌.再将1000mL/L浸提液经DMEM培养液稀释成500，750mL/L浓度浸提液备用.　　1.2.2细胞培养将对数生长期的L929细胞经2.5mL/L胰酶消化、吹打分散后计数,用含100mL/LFBS的DMEM培养液配成浓度为1×107/L的细胞悬液,按每孔100μL的细胞悬液接种于96孔培养板上,放入37℃，50mL/LCO2培养箱中.四周边缘孔不接种细胞,每孔加入100μL的DMEM

7、培养液,起边缘封闭作用.　　1.2.3MTT测试细胞培养24h后弃去原培养液,用PBS洗涤2次,进行培养液交换,按每孔200μL分别加入500，750mL/L的FPSA1浸提液,另设阴性和阳性对照组,分别加入等量无菌滤纸浸提液和含6.4mL/L苯酚的培养液,每组重复6孔,常规培养,每日在倒置显微镜下观察细胞形态及增殖情况.分别于加样后2，4，7d取出96孔板,在受试孔中每孔加入20μL的MTT溶液,37℃，50mL/LCO2培养箱中保温4h后弃去旧液,每孔加入150μL的DMSO,振荡10mi

8、n,在多道扫描酶标仪上测A490nm值,计算细胞的相对增殖率(RGR).RGR(%)=(实验组A490nm/阴性对照组A490nm)×100%,细胞毒性分级按如下标准［6］评价:RGR≥100为0级;80～99为1级;50～79为2级;30～49为3级;0～29为4级.　　统计学处理：用SPSS12.0统计分析软件,对数据采用方差分析和Tukey多重比较检验(α=0.05).　2结果　　2.1MTT测定加样后2，4，7d,阳性对照组与其余各组的A值之间均有显著性差异(P<0.01),500