颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性论文

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1、颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性论文康彪,马佳,赵铱民,赵信义,杨青芳【摘要】目的：利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂1（FPSA1）的细胞毒性进行评价.方法：采用MTT法评价FPSA1的细胞毒性.利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加500，750mL/LFPSA1浸提液,于加样后2，4，7d用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490nm值,计算相对增殖率,对FPSA1的细胞毒性进行评价.结果：随着时间推移,不同浓度的FPSA1浸提液对L929细胞增殖均无明显作用(

2、P0.05),各浓度FPSA1浸提液加样后2，4，7d之间差异无统计学意义(P0.05),.freelL/L的标准胎牛血清(FBS,杭州四季青公司)；100kU/L氨苄青霉素、100kU/L硫酸链霉素,pH=7.2～7.4；胰蛋白酶,四甲基偶氮唑盐(MTT)(美国Sigma公司)；四甲基偶氮唑盐溶液,实验前用磷酸盐缓冲液(PBS)新鲜配制,浓度为5g/L,过滤除菌后4℃避光保存,1any)；25cm2细胞培养瓶,96孔细胞培养板(NUNC,丹麦).1.2方法1.2.1浸提液制备将无菌滤纸裁成1cm×1cm试样备用,按每面涂50μL

3、的粘接剂使滤纸浸渍均匀,清洁空气轻吹2～3min,待粘接剂由白色乳液变至无色透明胶膜,依照ISO1099312样品制备要求［5］,试样按表面积与浸提介质比6cm2/mL加入含100mL/LFBS的DMEM培养液中,另将未涂粘接剂的无菌滤纸作为阴性对照按同样比例浸于相同培养液,放置在37℃，50mL/LCO2培养箱内浸提72h,分别得到1000mL/LFPSA1浸提液和阴性对照组浸提液,过滤除菌.再将1000mL/L浸提液经DMEM培养液稀释成500，750mL/L浓度浸提液备用.1.2.2细胞培养将对数生长期的L929细胞经2

4、.5mL/L胰酶消化、吹打分散后计数,用含100mL/LFBS的DMEM培养液配成浓度为1×107/L的细胞悬液,按每孔100μL的细胞悬液接种于96孔培养板上,放入37℃.freelL/LCO2培养箱中.四周边缘孔不接种细胞,每孔加入100μL的DMEM培养液,起边缘封闭作用.1.2.3MTT测试细胞培养24h后弃去原培养液,用PBS洗涤2次,进行培养液交换,按每孔200μL分别加入500，750mL/L的FPSA1浸提液,另设阴性和阳性对照组,分别加入等量无菌滤纸浸提液和含6.4mL/L苯酚的培养液,每组重复6孔,常规培养,每

5、日在倒置显微镜下观察细胞形态及增殖情况.分别于加样后2，4，7d取出96孔板,在受试孔中每孔加入20μL的MTT溶液,37℃，50mL/LCO2培养箱中保温4h后弃去旧液,每孔加入150μL的DMSO,振荡10min,在多道扫描酶标仪上测A490nm值,计算细胞的相对增殖率(RGR).RGR(%)=(实验组A490nm/阴性对照组A490nm)×100%,细胞毒性分级按如下标准［6］评价:RGR≥100为0级;80～99为1级;50～79为2级;30～49为3级;0～29为4级.统计学处理：用SPSS12.0统计分析软件,对数据采用

6、方差分析和Tukey多重比较检验(α=0.05).2结果2.1MTT测定加样后2，4，7d,阳性对照组与其余各组的A值之间均有显著性差异(P0.01),500mL/L和750mL/LFPSA1浸提液组之间A490nm差异无统计学意义(P0.05，表1)；在各时相500mL/L和750mL/LFPSA1浸提液组的RGR均大于80%,参照标准评分FPSA1的细胞毒性为1级,各组细胞RGR及毒性评级结果见表2.表1FPSA1与对照组的A490nm值（略）bP0.01vs阴性对照，500mL/LFPSA1，750mL/LFPSA

7、1.FPSA1:颜面赝复体粘接剂1.表2FPSA1与对照组的RGR及细胞毒性等级（略）bP0.01vs阴性对照，500mL/LFPSA1，750mL/LFPSA1.FPSA1:颜面赝复体粘接剂1.2.2倒置显微镜观察细胞生长情况加样后2，4，7d,在倒置显微镜下观察细胞生长情况，阴性对照组L929细胞形态正常,呈梭形,细胞突充分伸展,随着时间延长,细胞数量增加(图1A)；500mL/LFPSA1浸提液组细胞形态正常,生长良好,750mL/LFPSA1浸提液组局部可见少量细胞出现溶解或坏死(图1B,C)；阳性对照组

8、细胞数量明显减少,大量细胞出现固缩、坏死、崩解(图1D).3讨论由于生物材料容易浸出能引起组织反应或炎症反应的物质,这些物质大多是原料单体、小分子聚合物、溶剂等,所以生物材料在应用于人体之前,都必须经过严格的检验,除临床应用所要求的机