砷剂联合化疗药物治疗mdr人肝癌细胞初步研究

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1、砷剂联合化疗药物治疗MDR人肝癌细胞初步研究作者：蒋明东，向廷秀，彭志平，尹晓玲，李少林，鄢勇，王正洪［摘要］目的通过实验观察砷剂联合化疗药物对人肝癌MDR细胞的治疗和逆转作用，为临床改善肝癌疗效提供理论依据。方法按砷剂单用或联合化疗药物作用人肝癌细胞QGY-7703/cDDP和HepG2/ADM进行分组，采用光镜和电镜观察细胞形态结构及超微结构的改变，台盼蓝染色活细胞计数测定细胞增殖能力，MTT检测细胞毒作用，FCM进行细胞周期分布分析。结果肿瘤细胞药物作用后，电镜观察到细胞凋亡和凋亡小体，肿瘤细胞倍增时间延长，生长曲线下移，细胞毒作用明显，G0/G1期细

2、胞比例下降，G2/M期细胞比例增加。结论砷剂单用和联合化疗对MDR肝癌细胞生长具有抑制作用，同时能够部分逆转人肝癌细胞MDR。［关键词］砷剂；肝癌；联合治疗；逆转多药耐药［Abstract］ObjectiveTostudybinationofarsenictrioxideandchemicaltherapyintreatmentofMDRofhumanhepatocellularcarcinoma.MethodsThehumanhepatocellularcarcinomaHepG2/ADMandQGY-7703/cDDPadeintoeverygrades

3、bysingleandbinedarsenictrioxide.HepG2andQGY-7703edicroscopyandtransmissionelectronmicroscopyafterthehumanhepatocellularcarcinomacellsedbyfloetry(FCM).ResultsApoptoticcellandapoptoticbodyissionelectronmicroscopyincarcinomacellse,paredtocontrolgroup,thetumordoublingtimeorgrooveddoanh

4、epatocellularcarcinomaofMDR,furthermorereversepartiallytheMDR.［Keya；treatmentinbination；reversionofmultidrugresistance肝癌是高发的恶性肿瘤，且死亡率高，目前缺乏非常有效的治疗手段。临床诊断的病人多为中晚期肝癌，以化学药物治疗为主，而肿瘤细胞的多药耐药（multidrugresistance,MDR）严重阻碍药物化疗效果。因此，肝癌有效治疗及细胞MDR逆转成为近年肿瘤研究的热点。砷剂(arsenictrioxide,AsT)治疗血液系肿瘤取得突

5、破，对实体瘤也有一定效果。为此，笔者利用已建立的人肝癌MDR细胞系QGY-7703/cDDP和HepG2/ADM，观察AsT联合化疗药物对MDR人肝癌细胞生长的影响，探讨MDR肝癌新的有效治疗和逆转方法，以利于改善临床肝癌治疗效果。1材料与方法1.1药物和试剂亚砷酸注射液（哈尔滨伊达药业公司），ADM（法玛西亚公司），cDDP（海正药业股份公司），MTT、Trypanblue和DMSO（美国Sigma公司），RPMI1640培养液（GIBCO，USA），小牛血清(calfbovineserum,CBS)（杭州四季青生物制剂公司），0.25%胰蛋白酶(华美上海

6、分公司)。1.2肿瘤细胞培养人肝癌细胞QGY-7703、QGY-7703/cDDP和HepG2由重庆医科大学病理生理教研室汤为学教授惠赠。HepG2/ADM细胞株采用ADM浓度梯度递增法加量诱导建立。细胞培养：常规将肿瘤细胞接种到含10%热灭活小牛血清，并加入青霉素（100u/ml）和链霉素（100μg/ml）双抗的RPMI1640培养液中，37℃，5%CO2饱和湿度孵箱内培养，细胞呈单层贴壁生长。传代时用0.1%胰酶和0.02%EDTA溶液消化并离心，培养液稀释后再分瓶培养。QGY-7703/cDDP中0.1μg/mlcDDP浓度、HepG2/ADM中0.

7、1μg/mlADM浓度维持细胞MDR特性。1.3实验分组依QGY-7703、QGY-7703/cDDP、HepG2和HepG2/ADM细胞株分成4个实验组，另设不加药对照组。取对数期细胞制备细胞悬液，调整细胞浓度为5×105/ml,接种至96孔培养板，每孔200μl(相当于105个细胞),培养24h后加入实验药物，再共培养24h进行测定。药物分组为：AsT、ADM、cDDP、AsT+ADM和AsT+cDDP，参照各药临床用量的血峰浓度设定试验药物浓度。1.4细胞形态结构1.4.1HE-光镜观察5×104/ml单细胞悬液接种至内铺小玻片24孔培养板中，放到37

8、℃、5%CO2孵箱内培养72h，用PBS洗2遍，4%