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时间:2018-05-03
《砷剂联合化疗药物治疗mdr人肝癌细胞初步研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、砷剂联合化疗药物治疗MDR人肝癌细胞初步研究作者:蒋明东,向廷秀,彭志平,尹晓玲,李少林,鄢勇,王正洪[摘要]目的通过实验观察砷剂联合化疗药物对人肝癌MDR细胞的治疗和逆转作用,为临床改善肝癌疗效提供理论依据。方法按砷剂单用或联合化疗药物作用人肝癌细胞QGY-7703/cDDP和HepG2/ADM进行分组,采用光镜和电镜观察细胞形态结构及超微结构的改变,台盼蓝染色活细胞计数测定细胞增殖能力,MTT检测细胞毒作用,FCM进行细胞周期分布分析。结果肿瘤细胞药物作用后,电镜观察到细胞凋亡和凋亡小体,肿瘤细胞倍增时间延长,生长曲线下移,细胞毒作用明显,G0/G1期细
2、胞比例下降,G2/M期细胞比例增加。结论砷剂单用和联合化疗对MDR肝癌细胞生长具有抑制作用,同时能够部分逆转人肝癌细胞MDR。[关键词]砷剂;肝癌;联合治疗;逆转多药耐药[Abstract]ObjectiveTostudybinationofarsenictrioxideandchemicaltherapyintreatmentofMDRofhumanhepatocellularcarcinoma.MethodsThehumanhepatocellularcarcinomaHepG2/ADMandQGY-7703/cDDPadeintoeverygrades
3、bysingleandbinedarsenictrioxide.HepG2andQGY-7703edicroscopyandtransmissionelectronmicroscopyafterthehumanhepatocellularcarcinomacellsedbyfloetry(FCM).ResultsApoptoticcellandapoptoticbodyissionelectronmicroscopyincarcinomacellse,paredtocontrolgroup,thetumordoublingtimeorgrooveddoanh
4、epatocellularcarcinomaofMDR,furthermorereversepartiallytheMDR.[Keya;treatmentinbination;reversionofmultidrugresistance肝癌是高发的恶性肿瘤,且死亡率高,目前缺乏非常有效的治疗手段。临床诊断的病人多为中晚期肝癌,以化学药物治疗为主,而肿瘤细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)严重阻碍药物化疗效果。因此,肝癌有效治疗及细胞MDR逆转成为近年肿瘤研究的热点。砷剂(arsenictrioxide,AsT)治疗血液系肿瘤取得突
5、破,对实体瘤也有一定效果。为此,笔者利用已建立的人肝癌MDR细胞系QGY-7703/cDDP和HepG2/ADM,观察AsT联合化疗药物对MDR人肝癌细胞生长的影响,探讨MDR肝癌新的有效治疗和逆转方法,以利于改善临床肝癌治疗效果。1材料与方法1.1药物和试剂亚砷酸注射液(哈尔滨伊达药业公司),ADM(法玛西亚公司),cDDP(海正药业股份公司),MTT、Trypanblue和DMSO(美国Sigma公司),RPMI1640培养液(GIBCO,USA),小牛血清(calfbovineserum,CBS)(杭州四季青生物制剂公司),0.25%胰蛋白酶(华美上海
6、分公司)。1.2肿瘤细胞培养人肝癌细胞QGY-7703、QGY-7703/cDDP和HepG2由重庆医科大学病理生理教研室汤为学教授惠赠。HepG2/ADM细胞株采用ADM浓度梯度递增法加量诱导建立。细胞培养:常规将肿瘤细胞接种到含10%热灭活小牛血清,并加入青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)双抗的RPMI1640培养液中,37℃,5%CO2饱和湿度孵箱内培养,细胞呈单层贴壁生长。传代时用0.1%胰酶和0.02%EDTA溶液消化并离心,培养液稀释后再分瓶培养。QGY-7703/cDDP中0.1μg/mlcDDP浓度、HepG2/ADM中0.
7、1μg/mlADM浓度维持细胞MDR特性。1.3实验分组依QGY-7703、QGY-7703/cDDP、HepG2和HepG2/ADM细胞株分成4个实验组,另设不加药对照组。取对数期细胞制备细胞悬液,调整细胞浓度为5×105/ml,接种至96孔培养板,每孔200μl(相当于105个细胞),培养24h后加入实验药物,再共培养24h进行测定。药物分组为:AsT、ADM、cDDP、AsT+ADM和AsT+cDDP,参照各药临床用量的血峰浓度设定试验药物浓度。1.4细胞形态结构1.4.1HE-光镜观察5×104/ml单细胞悬液接种至内铺小玻片24孔培养板中,放到37
8、℃、5%CO2孵箱内培养72h,用PBS洗2遍,4%
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