多基因联合化疗药物治疗肿瘤的实验研究

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1、华中科技大学硕士学位论文多基因联合化疗药物治疗肿瘤的实验研究姓名：杨燕申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：张桂梅;冯作化2003.4.1华中科技犬学同济暇学院硕士学位论文摘要一、襄核表达TRAlL杀伤化疗后残存癌细胞和耐药细胞作用的研究【攮要l县鳃探讨不黼化疗药物作用藤的残移小鼠翳瘛缨爨H22黠TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的敏感性，以及TRAIL对药物抗^性H22细跑匏杀伤馋雳。～f方法小鼠全长TRAIL墓毽囊菝表遮矮粒—、mTRAIL．pcDNA3．1转染BHK细胞后，加入缀阿霉素(ADM)、丝裂霉素C(醚MC)、5一氟稼噻踺(5-FU)处

2、理戆，j、鬣搿癌绥魏株H22，MTT法检铡TRAIL、药物以及TRAIL与药物联合对H22的生长抑制作用；收集经上述因子作用后豹H22细胞，流式绍稔仅分析蠲亡细胞百分眈及残存缁胞周期分布。同时，比较ADM抗性及正常H22细胞对TRAIL诱胞表面寝达的矫源TRAIL蛋白能抑制H22腿生长抑制与凋亡百分比分别必45．3％秘10．2％。TRAIL与ADM或MMC联合均有协同作用，能提高细胞凋亡百分率，其凋亡百分数分别为28．1％、22．5％(与TRAIL单弱子馋麓相毙较，P<0。01)。TRAIL与5-FU联含{擘爱H22缀脆没有协同效应。TRAIL作用ADM抗性的H22细胞的凋亡

3、百分数为27．19Z与y来经TRAIL毒#瓣静药耪抗整H22蠡臆鞠耽，蓑舞有显鬻往(户

4、学位论文endostatin基因的真核表达质粒mTRAIL—pcDNA3．1(pTRAIL)、pCH510、endostatin-pcDNA3．1(pES)联合化疗治疗小鼠肿瘤的疗效，探讨肿瘤综合治H疗的可行性。f方法采用小鼠肝癌细胞H22接种建立肿瘤模型，通过化疗药物—、＼f丝裂霉素C(MMC)与pTRAIL、pCH510、pES裸DNA注射，观察不同种类、不同剂量的各组治疗因子对肿瘤生长的抑制作用；采用HE染色，比较不同治疗方案在组织学水平的疗效。结果与单因子、双因子相比，pTRAIL+pES+pCH510三因子联合的疗效最好(尸

5、e,／种质粒的治疗与一天两次、每次50u∥种质粒的治疗效果相比，抑瘤作用稍强，但统计学上差异不显著；MMC联合三因子能有效抑制1×105接种量肿瘤的生长，肿瘤生成率为37．5％(3／8)，有5只小鼠完全不长瘤，在组、厂织学水平可见，残存瘤细胞极少习结论MMC+pTRAIL+pES+pCH510能有效矿抑制小鼠肝细胞肿瘤生长，是一种极具潜力的肿瘤综合治疗配伍方案。【主题词】TRAIL；CH50；endostatin：化疗；基因治疗：小鼠肿瘤三、小鼠可溶性TRAIL原核表达质粒msTRAIL-pRSET的构建与表达【摘要】目的应用原核表达系统大量制备可溶性TRAIL蛋白。方法以小

6、鼠全长TRAIL真核表达质粒为模板，PCR扩增其可溶性片段(114aa～291aa)，插入原核表达载体pRSET。B中，得到目的克隆，将其导入工程菌BDPS，中，经IPTG诱导，SDS．PAGE检测重组蛋白的表达—／结果重组克隆经筛＼选、酶切鉴定，命名为msTRAIL．pRSET，其蛋白产物分子量为50KD左右，^／以包涵体形式存在J结论构建的msTRAIL．pRSET能够表达目的蛋白。J【主题词】TRAkL；可溶性蛋白；原核表达、四、利用比重分离的H22瘤细胞群体药物敏感性的初步分析【摘要】目的采用按比重分离细胞的方法，从一个侧面探讨肿瘤细胞异质性的表现，为肿瘤的个体化治疗

7、探，新的思痞＼≤?法利用密度梯度溶华中科技大学同济医学院硕士学位论文液将H22细胞分成比重不同的群体，将化疗药物阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)作用于各群细胞，MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用。结果密度梯度溶液可将H22细胞分成A(比重为1．057)、B(比重为1．062)、C(比重为1．067)、D(比重为1．072)、E(比重≥1．077)五群细胞，各群细胞对ADM与5一Fu的敏感性有区别，其中E群细胞对ADM与5．Fu均敏感，A、B、G群细胞对ADM敏感，对5一Fu不敏感，而D群细胞