猕猴单倍体相合外周血造血干细胞移植后多种细胞因子mrna表达的动态分析

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1、猕猴单倍体相合外周血造血干细胞移植后多种细胞因子mRNA表达的动态分析作者：黄雅静，孙琪云，刘丽辉，胡恺勋，范传波，边莉，郭梅，艾辉胜【摘要】本研究分析猕猴单倍体相合造血干细胞移植前后外周血单个核细胞中细胞因子（TGF-β，IL-2，IL-6，IL-10，IFN-γ，TNF-α，FAS-L）mRNA的表达并探讨这些细胞因子在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发生和病理变化中的作用，以寻找能够早期预测和鉴别诊断aGVHD的指标。5例猕猴经非清髓预处理后接受单倍体相合外周血造血干细胞移植；半定量逆转录聚合酶链

2、反应法（RT-PCR）检测移植前后8种细胞因子mRNA的表达，动态观察这些细胞因子在移植后aGVHD中的表达情况。结果表明：5例猕猴均成功获得造血重建。1例移植排斥，长期无病存活；其余4例为混合嵌合和完全嵌合植入，1例低比例嵌合植入经第二次输注供者外周血造血干细胞后获得高比例嵌合植入；1例发生肠道Ⅲ度GVHD。移植前后体内Th1和Th2类细胞因子都有不同程度的变化，在aGVHD期间TGF-β呈下调表达，其余均为上调表达；植入比例减低的猕猴各细胞因子也下降至移植前水平。结论：TGF-β在aGVHD发生前的

3、下降趋势可能是GVHD预测指标，并且能够作为肠道GVHD的鉴别诊断指标。【关键词】造血干细胞移植　　KiicStudyofVariousCytokinemRNAExpressionsinRhesusTreatedCellTransp-lantation　　AbstractThisstudyedtoanalyzethemRNAexpressionofcytokines（TGF-β，IL-2，IL-6，IL-10，IFN-γ，TNF-α，FAS-L）infiverhesustreatedcelltransp

4、lantationafternonmyeloablativepreparativeregimensandtoexploretheroleofthesecytokinesinthedevelopmentandpathologyofacutegraft-versus-host-disease(aGVHD).FiverhesusmonkeysrecEivednonmyeloablativehaploidenticalperipheralbloodstemcellstransplantation.Semi-qu

5、antitativereversedtranscriptionpolymerasechainreaction（RT-PCR）RNAexpressioninthetransplantationandaGVHD.Theresultsshoonkeysacquiredhematopoieticreconstitutionsuccessfully.Thegraftonkeyixedchimerismandfulldonorchimerism.Chimerismofloonkeyachievedhighcenti

6、gradeat35daysafterdonorstemcellinfusion.IntestinalaGVHDgradeⅢdevelopedinonemonkey.CytokinesofTh1andTh2changedaftertransplantation.InperiodofaGVHD，expressionofTGF-βdecreasedbutallothersincreasedinvariouslevels.HC配型用混合淋巴细胞反应法（MLR）按常规方法进行，最后计算刺激指数（SI），单向SI供

7、受者＝R供S受OD/R供S供OD，结果SI均>3。　　供者猴外周血干细胞动员和采集　　用G-CSF10μg/(kg·d)（惠尔血，Kirin公司），分2次皮下注射，动员供者的外周血干细胞，动员后第5天、第6天查血象，MF）：40mg/（kg·d）(移植前4天-移植后35天)，鼠抗人CD25单克隆抗体（塞尼哌）：1mg/kg(移植后1天，4天，8天)。　　嵌合状态分析　　移植后抽取7、14、21、30和60天的外周血及7、14、30和60天的骨髓，用PCR法检测嵌合水平。本研究建立了短串连重复序列－

8、聚合酶链反应（STR-PCR）相对定量检测移植后猕猴造血嵌合体的方法。对于供受体性别不同的猕猴，采用性别位点（amelogenin基因位点）进行嵌合体分析；对于性别相同的猕猴，采用6个猕猴STR位点（D4S2365，D15S644，D18S536，D7S826，D11S2002和D10S611）进行嵌合分析。简要的步骤为：移植前供者和受者标本分别用上述STR位点的特异性引物扩增，获得最少2个能区别供受体的位点（有信息位点）；移植后用有信息位