南蛇藤中扁蒴藤素提取分离工艺研究

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1、南蛇藤中扁蒴藤素提取分离工艺研究作者：冯玉静，王定勇，陈铭祥【摘要】　　目的对南蛇藤中扁蒴藤素提取纯化工艺进行研究。方法南蛇藤根粉经丙酮冷浸提取后，采用聚酰胺柱层析及硅胶柱层析进行分离纯化；以HPLC法测定产品中扁蒴藤素的含量，并以其为指标对分离纯化的主要工艺参数进行优化。结果将待分离的南蛇藤丙酮浸膏和聚酰胺(60～100目)按物料比0.02（质量比）装入层析柱中，常压下用体积分数75%的甲醇洗脱至洗脱液近无色，收集流分，浓缩后得到粗品，经硅胶柱层析进一步纯化，再经重结晶后纯度提高到98.0%以上。结论该工艺简单、成本较低，适于工业

2、化。【关键词】南蛇藤扁蒴藤素聚酰胺柱层析硅胶柱层析分离纯化　　Abstract:ObjectiveTostudytheisolationandpurificationconditionofpristimerinfromCelastrusorbiculatusThunb.MethodsPristimerinidecolumnchromatographyandsilicagelcolumnchromatography,andthecontentofpristimerininedbyHPLC.Themainisolationfactors

3、ized.ResultsTheoptimumisolationconditionspletopolymideethanolnchromatographyandrecrystallized.Finally,thepurityreachedto98%.ConclusionThismethodissimpleandeconomic,erin；polyamidecolumnchromatography；silicagelcolumnchromatography　　南蛇藤CelastrusorbiculatusThunb.系卫矛科南蛇藤属植物

4、，又名过山风、苦树皮等。全草均可入药，有清热、祛风、除湿、活血、解毒等功效，常用于治疗风湿性关节炎、腰腿痛等症［1］。目前已从南蛇藤植物中分离得到60余种化合物，主要为β二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯、生物碱、三萜类，此外还有黄酮类、有机酸类、多元醇类、甾体类及鞣质［2］。1996年,蒋毅［3］等从南蛇藤根皮中提取出橙红色结晶扁蒴藤素。　　　　扁蒴藤素是一种醌甲基三萜类化合物，具有广谱抗肿瘤［3,4］、抗炎［5］、抗氧化［6］等多种药理活性，主要存在于卫矛科和希藤科植物中。有研究发现，在给药初期的24h内，非致瘤性的人类乳房上皮细胞菌株

5、MCF10A对扁蒴藤素的抵制力是人乳腺癌细胞（MDAMB231）的2倍，表明扁蒴藤素对肿瘤细胞具有很好的选择性，可开发成为高选择性的抗肿瘤化疗药［7］。2008年,Yang等［8］发现扁蒴藤素为一种新的蛋白酶体抑制剂，使得扁蒴藤素成为抗肿瘤研究的热点。南蛇藤分布广泛，在我国东北、华北、华东、西北、西南及湖北、湖南、广东等均有分布，资源丰富，因此目前的研究常选择南蛇藤作为扁蒴藤素的来源植物。目前已有一项从粉背南蛇藤(Celastrushypoleucus)中提取扁蒴藤素的工艺专利［9］，本文选择南蛇藤作为来源植物，采用聚酰胺柱层

6、析和硅胶柱层析结合的双柱层析的方法得到高纯度的扁蒴藤素。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　　　南蛇藤根皮采自广东阳春，扁蒴藤素对照品为实验室自制（经HPLC测定，纯度≥98%），甲醇（色谱纯，迪马公司），甲醇、石油醚、乙酸乙酯（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司），水（自制超纯水/蒸馏水），聚酰胺（60～100目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂），硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂分厂）。　　1.2仪器　　　　RE52CS旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂)；SHZD(Ⅲ)循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸科技有限公司；LC

7、10ATvp高效液相色谱仪（SHIMADZU）；SPDM10Avp紫外检测器（SHIMADZU）。　　1.3实验方法　　　　将丙酮提取液过滤，浓缩，拌入聚酰胺，烘干，研磨，过筛，得粗品，经聚酰胺柱层析分离，以HPLC法测定粗品中扁蒴藤素的含量，以产品得率和产品纯度（质量分数)为指标，分别考察洗脱剂、物料比等影响因素，优化出最佳的分离工艺参数。粗品再通过硅胶柱层析进一步纯化，得到较纯品。再选用不同的溶剂进行重结晶，从中选出最佳的溶剂进行精制，得到扁蒴藤素橙红色针状结晶。　　1.4扁蒴藤素的含量测定方法　　1.4.1对照品溶液的配制

8、精密称取扁蒴藤素对照品5.1mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀，制得质量浓度为204.0μg/mL的对照品溶液。分别吸取1、2、3、4、5mL的对照品溶液于10mL的量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，得质量浓度依次为2