库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究

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1、库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究作者：肖凤霞，邓少东，田青，邓超明1，周改莲【摘要】目的建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、5羟吲哚乙酸(5HIAA)，采用PhenomenexC18反相色谱柱(150mm×4.60mm，5μm)，流动相为缓冲液乙腈(体积比87∶13)，流速为1mL·min-1，柱温为35℃。结果4种单胺类神经递质的最低检测限为0.01515～0.01815ng,回收率为

2、85.3%～100.5%。结论该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。【关键词】高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器　　(1.SchoolofTCM,GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,GuangzhouGuangdong510006,China;2.TaishanMedicalUniversity,Taian,Shandong271016,China)Abstract:ObjectiveToestablishar

3、apidmethodfordeterminingmonoamineneurotransmittersinrats’braintissuebyHPLCedonaPhenomenexC18column(150×4.60mm,5micron).Themobilephase,consistedofacetonitrileL·min-1.Thecolumntemperatureined.ResultsTheminimummeasurementlimitethodisrapid,accurate,highlysensitiveandeasytoop

4、erate.Theprocedureissuitablefordeterminingthemonoamineneurotransmittersinrats’braintissue.　　Keyonoamineneurotransmitters;coularraydetector　　单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、五羟吲哚乙酸(5HIAA)等物质，是哺乳动物和人类中枢神经重要的信息传递物质。研究该类物质及其代谢产物在体内的含量变化，对于阐明药物在体内的作用机制，提供了有力的依据。尤其在老年痴呆症、

5、抑郁症、儿童多动症、儿童多动秽语综合征等疾病与神经递质含量关系、药物治疗效果等方面的研究中，可提供非常有用的信息[1]。目前　　2.4线性关系考察　　取混合对照品贮备液适量，置6个容量瓶中，分别加入0.1mol·L-1HCLO4稀释成不同质量浓度的系列混合对照品溶液，使所含各对照品的质量浓度分别为0.004、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5μg·mL-1,分别精密吸取15μL进样。以各组分的质量浓度(ρ)为横坐标,各组分的峰面积(A)为纵坐标进行线性回归,4种单胺类神经递质的线性关系考察结果见表1。表14种单胺类神经递质的线性关

6、系考察结果　　2.5精密度试验　　分别配制低(0.02μg·mL-1)、中(0.5μg·mL-1)、高(2.5μg·mL-1)3种不同质量浓度的混合对照品溶液,分装后贮存于-80℃冰箱内。日内连续测5次,计算日内精密度;每份样本每日测5次,连续测定5日,计算日间精密度，见表2。　　2.6稳定性试验　　取供试品溶液，分别于0、4、8、12、24h进样10μL，计算各组分峰面积积分值RSD值，分别为1.18%(NE)、3.55%(DA)、1.19%(5HIAA)、0.87%(5HT)，表明供试品溶液在4℃条件下放置24h稳定性良好。　　2

7、.7加样回收率实验　　取大鼠脑组织,经预处理后测定峰面积。再取上述脑组织分别加入低(0.02μg·mL-1)、中(0.5μg·mL-1)、高(2.5μg·mL-1)3种浓度的混合对照品溶液，按照“2.2.4”项下方法制备加样回收供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表2。表2回收率与日内、日间精密度　　2.8检测限测定　　取“2.4”项下配制的混合对照品溶液(0.004μg·mL-1)不断用0.1mol·L-1HCLO4稀释，进样15μL，依法测定。以信噪比S/N≥3∶1时样品进样量为该条件下的检测限，测得各神经递质的检测限分别0.01

8、815(NE)、0.01605(DA)、0.0168(5HIAA)、0.01515(5HT)ng。　　3讨论　　3.1样品处理方法的选择在实验过程中发现只用HCLO4处理样品后即进样测定，