单胺类神经递质高灵敏的分析方法研究

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1、中文摘要单胺类神经递质作为～种重要的神经内源性物质，控制着人体的行为与情感。近年来的医学研究发现，单胺类神经递质如去甲肾上腺素m)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)矛115一羟色胺(5一HT)的浓度异常可指示此类物质在生物体内合成与代谢的紊乱，进而能够为一些疾病的预防与诊断提供更为全面客观的医学数据。由于体液组成复杂，且单胺类神经递质在体液中的含量很低，因此，发展单胺类神经递质高效分离富集和高灵敏分析方法具有重要意义。与传统的样品前处理技术相比，液相微萃取(LPⅧ)由于具有省时、高效、有机溶剂消耗少、等优点，在复杂基质中的

2、低浓度分析物分离富集方面已得到广泛应用，但是LPME在单胺类神经递质分离富集方面的研究还很少。本论文为单胺类神经递质高灵敏分析方法研究，主要集中在单胺类神经递质色谱分析方法的建立以及复杂基质尿样中单胺类神经递质的分离与富集方法研究。内容分为以下三个部分：1．对样品的前处理方法进行了综述，重点介绍了液相微萃取和分散液相微萃取技术的产生与发展。2．对单胺类神经递质的色谱条件进行了考察与探究，使用HPLC结合电化学检测器(ECD)，对四种单胺类神经递质NE、E、DA和5-HT在电极表面的电化学特性及色谱保留行为进行了探讨，建立

3、了NE、E、DA、5-HT的HPLC—ECD高灵敏检测方法。NE、E、DA和5-HT分析T的线性范围分别为1．100、0．8．100、O．8—100、2．2．100}tg／mL，相应的检测限依次为O．12、O．08、O．08和0．22gg／mL。3．为了提高萃取的选择性，扩大液相微萃取的应用范围，提出了基于三辛基氧膦(TOPO),llZ．(2．乙基己基)磷酸酯(D2EHPA)混合载体的载体辅助液相微萃取(CM．LPⅧ)方法，对四种单胺类神经递质进行了分离提取，借助反萃取(BE)及之后的反萃相固化法(SSP)，有效简化了微

4、升级不互溶两相体系的分离操作，并对载体种类、配比、浓度、料液pH、反萃相种类进行了优化。结果表明，在料液相pH=8的情况下，TOPO与D2EHPA的物质的量之比为2：1，载体总浓度为O．5mol／L时，四种分析物可以获得超过-88％的萃取效率。利用HCl溶液进行反萃取，去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、五羟色胺分别获得了36．1、34．5、32．8、22．6的富集比。四种单胺类神经递质测定的线性范围为O．01—2gg／mL(t,m、E、DA)与0．02—2}tg／mL(5一HT)，NE、E、DA和5-HT相应的检测限分别达

5、到了5．7、5．5、6．1和10．8ng／mL，相对标准偏差均低于12％，说明建立的载体辅助液相微萃取．反萃取一反萃相固化．高效液相色谱(CM，LPME．BE．SSP—HPLC．ECD)测定单胺类神经递质方法是一种简单、快速、灵敏的新方法。关键词：单胺类神经递质；高效液相色谱一电化学检测；载体辅助；液相微萃取；分离富集IIABCTRACTAsanimportantendogenoussubstance，monoamineneurotransmittershavethevitalinfluenceonpeople’Sbeh

6、aviorsandemotions．Medicalresearchesinrecentyearsshowthattheabnormitiesinconcentrationofmonoamineneurotransmitters，norepinephrine(NE)，adrenaline(E)，dopamine(DA)，and5-hydroxytryptamine(5-HT)，implythedisorderinthesynthesisandmetabolismofsuchendogenoussubstancesinorg

7、anisms，andthencanprovidemorecomprehensiveandobjectivemedicaldataforthepreventionanddiagnosisofsomediseases．Accordingtothecomplexityincompositionofthebodyfluidandlowcontentofthemono．amineneurotransmittersinbodyfluids，todevelophighefficientseparationandenrichmentme

8、thodandsensitiveanalyticalmethodofmonoamineneurotransmittersissignificant．Comparedwithconventionalsamplepre—treatmentmethod，liquid—phasemicroextraction(LPME)du