基于荧光探针的神经递质类生物胺的色谱分析研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名(中英对照)基于荧光探针的神经递质类生物胺的色谱分析研究Applicationinvestgationofthechromatographicanalysisofneurotransmitterbiogenicaminesbasedonfluorescentprobe作者姓名：魏甜指导教师姓名：曹丽伟及学位、职称：博士副教授学科、专业名称：化学分析化学学位类型：学术型论文提交日期：2018年4月论文答辩日期：2018年6月8日答辩委员会主席：李攻科教授论文评阅人：暨南大学硕士学位论文摘要生物胺是一类含氨基的具有生物活性的低分子质量化合物，它们以较低的浓度普遍存在于

2、自然界中。生物胺在许多生理功能中起着重要作用，例如，神经递质类生物胺在突触传递中担当“信使”作用。摄入适量的生物胺可以加强免疫力、促进人体生长和代谢等，但如果摄入过量则会引起一些不良反应或疾病，如血压变化、嗜铬细胞瘤、头痛、腹腔痉挛等。此外，生物胺还存在于多种食品尤其是发酵食品、水产品及肉类产品中。这些食品中生物胺含量与其质量密切相关，有望成为评价此类食品鲜度的一个重要指标。因此，建立快速、准确和灵敏的生物胺的分析检测方法具有极其重要的意义。本论文采用高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）和毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（CE-LIF），并结合荧光试剂衍生、固相萃取等技术，分析测定

3、人血液和尿液样品中的生物胺。研究内容主要概括为以下三个部分：（1）采用毛细管电泳-激光诱导荧光法（CE-LIF）和固相萃取-毛细管电泳-激光诱导荧光法（SPE-CE-LIF）的两种分析方法，以5-(4,6-二氯-s-三嗪-2-氨基)荧光素（DTAF）作为荧光衍生试剂，测定血清中的去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺。结果表明，在pH为9.0的硼酸盐缓冲溶液中，温度为37°C时，衍生反应在40min内完成。以γ-氨基丁酸为内标，在含有12mmol/LBrij-35的32mmol/L的硼酸盐缓冲溶液中（pH9.5），分析物在λex=473nm的波长下，8min内实现基线分离。采用CE-LIF法时，

4、去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺的检出限（S/N=3）分别为1.2、0.1和0.4nmol/L；采用SPE-CE-LIF时，去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺的检出限分别为0.2、0.01和0.05nmol/L，检出限降低了6到10倍。利用SPE-CE-LIF法检测血清样品的加标回收率为91.3%-104.6%。（2）本实验建立了以BODIPY类荧光染料（1,3,5,7-四甲基-8-N-羟基琥珀酰亚胺丙酸酯-二氟化硼-二吡咯甲烷，TMB-NHS）为柱前衍生试剂，采用HPLC-FLD法测定去甲肾上腺素、肾上腺素、左旋多巴及多巴胺的分析方法。详细探讨了衍生条件和色谱分离条件。衍生反应在35°C下，

5、30min内完成。在λex/λem=493nm/513nm的波长下，去甲肾上腺素、肾上腺素、左旋多巴及多巴胺衍生物在15min内达到基线分离，检出限（S/N=3）分别为1.0、2.0、5.0和0.5nmol/L。将新建立的方法用来测定人类血清和尿液样品中的儿茶酚胺及左旋多巴，加标回收率在93.3%-106.7%之间。（3）建立了分离检测5-羟色胺、酪胺和多巴胺三种生物胺的CE-LIF方法。以TMB-NHS为荧光标记试剂，以30mmol/L的柠檬酸钠溶液（pH9.1）为背景缓冲溶液，当分离电压I暨南大学硕士学位论文为10.0kV时，在λex=473nm的波长下，三种生物胺在10min内实现

6、了良好的分离。5-羟色胺、酪胺和多巴胺的检出限（S/N=3）分别为0.3、0.02和0.2nmol/L。分析物的峰面积和迁移时间的相对标准偏差（RSDs）的范围分别在0.7%-4.4%和0.2%-2.0%之间。将该方法成功应用于人血清和尿液样品中生物胺的测定，回收率在91.0%-103.1%之间。关键词：生物胺、1,3,5,7-四甲基-8-N-羟基琥珀酰亚胺丙酸酯-二氟化硼-二吡咯甲烷（TMB-NHS）、5-(4,6-二氯-s-三嗪-2-氨基)荧光素（DTAF）、毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（CE-LIF）、固相萃取-毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（SPE-CE-LIF）、高效液相色谱

7、-荧光检测法（HPLC-FLD）II暨南大学硕士学位论文AbstractBiogenicamines(BAs)areafamilyofamino-containing,biologicallyactive,andlowmolecularweightcompoundsthatareubiquitousinnatureatlowconcentrations.BAsareaclassofneurotransmitterswithpoten