脑梗饮对局性灶脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

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1、脑梗饮对局性灶脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究【摘要】目的观察脑梗饮对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织损伤的保护作用，并进一步探讨其作用机制。方法采用大脑中动脉栓塞法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。分别运用免疫组化、TTC染色和ZeaLonga5分制评分法，观察脑梗饮治疗后脑组织中Bcl2蛋白表达、梗塞体积以及神经行为变化。结果与模型组比较，治疗组神经功能损害症状明显减轻（P＜0.05）；脑梗塞体积缩小约40%；在各时点Bcl2表达均高与模型组（P＜0.05）。结论脑梗饮通过益气养阴、活血通络等综合调控措施不仅能上调凋亡抑制基因Bcl2表达，缩小脑梗塞体积，而且能改

2、善神经损伤症状，减轻脑组织结构损伤，对脑缺血再灌注引起损伤有明显保护作用。【关键词】脑梗饮Bcl2蛋白缺血再灌注损伤　　ExperimentalStudyoftheProtectiveEffectsofNaogengyinonCerebralIschemia-reperfusionInjuryinRats　　Abstract：ObjectiveTomeasuretheprotectiveeffectsofNaogengyinoncerebralischemiareperfusioninjuryinratanditsmechanisms.MethodsThemodelof

3、focalreperfusioninjuryaftercerebralischemiainratsadebymiddlecerebralarteryocclusion.TheeffectofNaogengyinonexpressionofBcl2proin,cerebralinfarctvolumeandbehavioralchangeinratsbraintissuemunohistochemicalmethod,TTCstainingandZeaLongamethodrespectively.Resultsparedeofcerebralinfarctiondecre

4、ased40%intreatedgroups.Bcl-2expressionofthetreatedgroupsincreasedmorethanthatofthecontrolgroupsineachhourpoint.Thereia-reperfusioninjurybyincreasingrestrainmechanismsoftheapoptosisofneuronalcellandexpressionofBcl2protEIn,reducingthevolumeofcerebralinfarctionanddamagetobraintissue.　　Keyia

5、reperfusion急性脑缺血——再灌注（IR）损伤可引起严重的神经功能障碍，甚至危及生命，寻找有效的治疗药物及措施以促进卒中后中枢神经系统功能恢复，一直是相关学科研究的重点之一。近年来关于中医药脑保护作用的研究也越来越受到重视。脑梗饮是王幼奇教授临床防治中风病常用经验方，在多年的临床应用中取得良好疗效。本研究从抑制脑神经细胞凋亡和缩小脑梗塞体积角度研究脑梗饮的作用机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　健康CAO动物模型。结扎大鼠颈外动脉，自颈总动脉分叉处向颈内动脉插入栓线(18.5±0.5)mm，阻断大脑中动脉血流，造成局灶性脑缺血。术后将栓线尾部置于皮下，缺血2h后

6、轻拔栓线造成血流再灌注。存活大鼠再灌注6，12，24h后观察大鼠行为变化。进行行为评分参考ZeaLonga的五分制评分标准：①0分：正常，无神经损伤症状；②1分：对侧前爪部分屈曲或完全屈曲；③2分：向偏瘫侧转圈；④3分：向偏瘫侧倾倒；⑤4分：不能自发行走，意识丧失。假手术组，除不插线外，其余步骤同上。　　1.2.2分组与给药将造模成功动物随机分为假手术组、模型组和治疗组。除假手术组外，其余两组每组再分为缺血再灌注后6，12，24h3个小组，总计7小组，最终手术合并实验成功35只，每组5只。假手术组、模型组和治疗组分别于术前1周按1ml/100g/次，2次/d连续灌胃给予盐水

7、和脑梗饮。治疗组于术前3h及术后3，6，12h分别再灌胃给药1次。　　1.2.3脑组织Bcl2蛋白检测大鼠分别于缺血再灌注后不同时间点，过量麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用4℃肝素化生理盐水（2×105u/L）150ml快速冲洗，继以0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）配制的4%多聚甲醛灌注固定30min，然后断头取全脑，经4%多聚甲醛固定24h，然后行梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋。用切片机在视交叉层面冠状切片，切片厚7mm。每组间隔取5张切片，进行免疫组化检测。在多媒体病理图像分析仪（CMIAS008