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时间:2018-11-18
《rhepo对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、rhEPO对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究作者:周铁柱王薇胡晓颖陈雪【摘要】 目的观察rhEPO对缺血性卒中脑海马区不同时间点S100B蛋白表达的动态变化,研究rhEPO对局灶性脑缺血再灌注损伤影响的可能机制。方法取66只SD大鼠建立局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型,随机分成假手术对照组(n=6)、脑I/R组(n=30)、rhEPO治疗组(n=30),按再灌注时间分为5个亚组,每个亚组6只(6h组、12h组、1d组、3d组、7d组),缺血2h后开始再灌注。免疫组化法检测缺血不同时间各组脑海马缺血中心和周围区S100B蛋白,原位末端标记技术检
2、测各组脑海马缺血中心和周围区神经细胞凋亡。结果脑I/R损伤组与假手术对照组比较细胞凋亡数明显增多(P<0.05),rhEPO治疗组与脑I/R组相比,凋亡细胞数明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果显示,I/R组与假手术对照组相比,S100B蛋白表达明显增加(P<0.05),rhEPO治疗组与脑I/R组相比,S100B蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论rhEPO可能通过减少S100B蛋白表达、抗凋亡对局灶性脑缺血I/R产生保护作用。【关键词】EPO;脑缺血;再灌注脑损伤;凋亡 近来研究发现,重组人红细胞生成素(rhEPO)对
3、脑缺血再灌注损伤(I/R)具有神经保护作用〔1〕,S100B蛋白是神经胶质细胞分泌的蛋白质,是反映神经细胞损伤的标记物,目前国内外缺少给予rhEPO后脑缺血灌注区S100B蛋白动态观察的相关报道。为进一步探讨rhEPO对缺血性脑损伤产生保护作用的机制,本文观察了大鼠局灶性脑缺血再灌注后腹腔内注射rhEPO后大鼠海马区S100B蛋白表达的影响。 1材料与方法 1.1材料 健康etamorphImagingSystem)(中国医科大学实验技术中心)。 1.2方法 1.2.1动物模型制备及分组 采用ZeaLonga〔1〕的大脑中动脉线栓法并加
4、以改进,制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠用1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉,动物仰卧位固定于手术台上,颈正中切口,分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA),结扎ECA及CCA,在CCA分叉处剪一切口,将尼龙线栓子经CCA和ICA进入到大脑中动脉起始部,阻断右侧大脑中动脉,尼龙线栓子插入的深度距ICA和ECA分叉处为(20±0.5)mm,扎紧ICA处的备用线。假手术对照组除不插入栓子外其余同实验组,手术中和手术后维持动物体温在37℃左右,缺血2h后,拔出栓子2mm,使血液再灌注,成功后假手术对照组及缺
5、血组分别腹腔内注入0.3ml生理盐水,治疗组腹腔内注入rhEPO(4000U/kg)0.3ml(1000U),按不同缺血时间断头,取脑组织。该模型成功的标志:右侧Horner征,左侧出现以前肢为重的偏瘫。实验分3组:假手术对照组6只;I/R组及rhEPO治疗组,每组30只,均为脑缺血2h再灌注6、12h、1、3、7d处死,每个时间点6只。 1.2.2免疫组化染色检查 各组大鼠至指定时间点处死后断头取脑,取前囟前后1mm脑组织,常规固定、石蜡包埋、每隔100μm连续冠状切片(厚6μm),进行免疫组化染色检测S100B蛋白的表达情况。显微镜下观察海马
6、细胞胞浆有棕褐色颗粒者为阳性细胞。 1.2.3TUNEL原位凋亡染色法检测细胞凋亡 按照原位TUNEL试剂盒说明书对各组大鼠脑组织切片进行凋亡染色,细胞核中出现棕褐色颗粒者为阳性细胞。 1.3统计学处理 每张切片中采集海马4个高倍视野,其中每个视野中细胞总数不少于100个。所测数据以x±s表示,组间比较采用SPSS13.0软件进行t检验。 2结果 2.1各组S100B蛋白表达 脑I/R损伤组与假手术对照组相比,S100B蛋白表达明显增加(P<0.05),rhEPO组较脑I/R组S100B蛋白表达明显减少(P<0.05),见表1、图
7、1。表1不同脑I/R时间点各组大鼠海马S100B蛋白表达(略) 2.2神经细胞凋亡情况 脑I/R组与假手术对照组比较神经细胞凋亡数明显增多(P<0.05),rhEPO组较缺血再灌注损伤组比较神经细胞凋亡数明显减少(P<0.05),见表2、图2。表2不同脑I/R时间点各组海马细胞凋亡数(略) 3讨论红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是一种酸性糖蛋白,对红细胞的生成起促进作用,自从rhEPO上市,许多研究已表明EPO对脑缺血有神经保护作用,作用机制目前有几种理论:Morishida等〔2〕认为EPO是通过激活Ca2+通道和MAPK
8、通路来诱发各种神经反应,如保护神经元对抗谷氨酸盐的毒性、多巴胺的释放和NO的合成;Sakanaka等〔3〕认
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