甲胺对大鼠内皮的慢性毒理研究

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1、甲胺对大鼠内皮的慢性毒理研究【摘要】目的：探讨ethods:Themethylaminegroup(20)andcontrolgroup(10)inistratedethylamine(50mg/kg)andNS(50mL/kg),respectively.Aftersixmonths,thethoracicaortasmunohistochemistryandobservedtheexpressionofvon恢复进食。星期天自由饮食。每两周称量大鼠体重，依据体重调整给药量。1周1轮回，灌胃持续6个月。　　1.3样本采集　　大鼠灌胃后6个月，行戊巴比妥腹腔麻醉，先心脏采动脉

2、血离心得血浆分装储存于－70℃冰箱，再活体灌注固定液［体积分数2％的多聚甲醛、体积分数2.5％的戊二醛和0.1moL/L的磷酸盐缓冲液的混合液(pH7.4)］。固定好的胸主动脉修成4～5mm环以制作蜡块，升主动脉及心内膜修成1mm×1mm×1mm大小以备透射电镜分析。　　1.4NO测定　　NO浓度测定采用硝酸还原酶法。用酶标仪在550nm波长测定吸收光值。按照NO试剂盒要求进行操作和浓度计算。　　1.5血浆SSAO活性及甲醛浓度测定　　SSAO活性测定［4］：苯甲胺作为测定SSAO活性的底物。0.2mL的血浆用氯吉林在室温下孵化30min以抑制单胺氧化酶的活性。然后加入180

3、μL苯甲胺在37℃水浴1h，用2，4_二硝基苯肼与酶促反应产物苯甲醛反应生成衍生物，用高效液相色谱方法(紫外检测)分析。　　血浆甲醛浓度测定［5］：0.2mL分装血浆、0.1mL氨苄西林溶液(2.5mg/mL)、0.25mL三氯乙酸(体积分数20%)和0.8mL的水加入一玻璃瓶，30min强力漩涡混匀后，玻璃瓶(90℃)加热1h。反应产物用乙醚萃取。萃取液在40℃下氮气吹干，得到干燥产物用体积分数50%乙腈_水溶解，然后用反相高效液相色谱法(荧光检测)分析。　　1.6免疫组化　　固定好胸主动脉，并经系列梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡后制成蜡块；4μm组织切片粘贴于载玻片上；组

4、织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精、蒸馏水水化后用微波抗原修复(高档4min后换低档15min)；体积分数3％H２Ｏ２5min以消除内源性过氧化物酶；卵白素封闭液15min、缓冲液洗涤2次；生物素封闭液15min；加兔抗人多克隆抗体(1∶100)4℃过夜、缓冲液漂洗15min×3次；再加生物素二抗37℃孵育40min，用缓冲液漂洗2次；再加HSS_HRP三抗37℃孵育30min，用缓冲液漂洗2次；DAB显色10min；苏木精对比染色；碳酸锂反蓝。封固后组织切片在显微镜下拍照。　　1.7超微结构分析　　固定好升主动脉与心内膜，并用磷酸缓冲液漂洗15min×3次，体积分数2％饿酸(1m

5、L/样本)固定1h，再用磷酸缓冲液漂洗3次，体积分数50％酒精漂洗15min，加入饱和醋酸铀染色后，再酒精脱水，经Epon812渗透包埋制成胶囊，用钻石刀切成50nm厚薄片，经醋酸铀和柠檬酸铅染色，用透射电镜观察。　　1.8统计学处理　　实验结果用SPSS12.0统计软件分析，采用独立样本t检验，结果用±s表示。　　2结果　　2.1.Oxidativedeaminationofmethylaminebysemicarbazide_sensitiveamineoxidaseleadstocytotoxicda_mageinendothelialcells［J］.Diabetes

6、，1993，42(4)：594-603.　　［3］ConklinDJ,CoannRJ,etal.Vasoactiveeffectsofmethylamineinisolatedhumanbloodvessels:roleofsemicarbazide_sensitiveamineoxidase,formaldehyde,andhydrogenperoxide［J］.AmJPhysiolHeartCircPhysiol，2004，286:H667-H676.　　［4］LiH,LuoitchellSC,ZhangAQ.Methylamineinhumanurine［J］.Clin

7、ChimActa，2001，312:107-114.　　［7］YuPH.Increaseofformationofmethylamineandformaldehydeinvivoafteradministrationofnicotineandthepotentialcytotoxicity［J］.NeurochemRes，1998，23(9):1205-1210.　　［8］HeckHD,CasanovaM,StarrTB.Formaldehydetoxicity_nepairmentofmethylam