山东产不同农家品种瓜蒌的种子蛋白电泳分析

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1、山东产不同农家品种瓜蒌的种子蛋白电泳分析作者：孙稚颖，周凤琴，郭庆梅【关键词】瓜蒌；,,农家栽培品种；,,种子蛋白；,,SDS　　摘要：目的：鉴定山东产瓜蒌的不同农家品种，并探讨它们的亲缘关系。方法：利用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对山东产瓜蒌的不同农家品种、野生种及湖北栝楼进行种子蛋白电泳分析，并绘制指纹图谱。结果：山东产瓜蒌不同农家品种和野生种种子的蛋白电泳图谱具有多条共有带，而与湖北栝楼图谱差异显著。结论：种子蛋白电泳分析可用于瓜蒌不同农家栽培品种的辅助鉴别，仁瓜蒌与牛心瓜蒌、小光蛋与野瓜蒌彼此间亲缘关系较近。　　关键词：瓜蒌；农家

2、栽培品种；种子蛋白；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳　　AnalysisofSeedProtEinElectophoresisofFarmCultivarsofFructusTrichosanthisfromShandong　　Abstract:Objective:TodeterminedifferentcultivarsofFructusTrichosanthisinShandong,andexplorethEIrgeicrelationships.Methods:SDS-polyacrylamidegeleletrophoresisployedt

3、oanalyzetheseedproteinofdifferentcultivarsandShandongandTrichosantheshubehensis,andthefinger-printsanymonbandsamongdifferentcultivarsandthem.Conclusion:AnalysisofseedproteinelectophoresiscanbeusedtodiagnosisfarmcultivarsofFructusTrichosanthis,andtherearecloserrelationshipsb

4、etple.　　Keycultivars;Seedprotein;SDS-PAGE　　蛋白质作为基因的直接稳定产物，能反映生物DNA组成上的差异，种子蛋白是植物体中一类有高强度表达，且能在种子内积累到很大量而不降解的蛋白质，其电泳谱带具有高度稳定性、专一性和叠加性。种子蛋白作为遗传标记常被用于种、属间关系、种下遗传多样性分析、品种鉴定及植物繁育系统的鉴别［1，2］。瓜蒌为传统的常用中药，具有清热涤痰、宽胸散结、润燥滑肠的功能，临床用于肺热咳嗽、痰浊黄稠、胸痹心痛、结胸痞满、乳痈、肺痈、肠痈肿痛、大便秘结等症。瓜蒌是山东著名的道地药材之一，历史

5、上产量和质量均列全国之首，原植物为葫芦科栝楼Trichosantheskirilo.［3］。由于长期的栽培选育，形成了一系列的农家栽培品种；近年来，又由于一些地区和药农的盲目引种，致使瓜蒌的农家栽培品种出现混乱，甚至混种其他种类，质量变化较大，极大的影响了山东道地药材瓜蒌的生产发展。本实验采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对山东道地药材瓜蒌的不同农家栽培品种、野生种以及对照湖北栝楼的种子蛋白进行了分析研究，旨为它们的分类鉴定、亲缘关系以及进一步的育种研究提供参考资料。　　1材料和方法　　1.1材料收集各农家品种成熟果实，取出种子，洗净晾干。

6、供试样品来源见表1，均经山东中医药大学药学院周凤琴教授准确鉴定。　　1.2方法　　1.2.1蛋白质提取种子去种皮，称重0.1g，加稀释4倍的浓缩胶缓冲液（PH6.7）2ml冰浴研磨，离心取上清液，加入等体积样品处理液，沸水浴3min，冷却后10000转离心5min，4℃贮藏备用。　　1.2.2电泳［4］采用SDSPAGE法，分离胶10%，浓缩胶5%，垂直平板电泳，加样量为20μl。电极缓冲液为TrisGly（pH8.3）系统，起始电压75V，在指示剂进入分离胶后改为150V，恒压电泳3h，待指示剂至胶板下沿1cm左右停止电泳。　　表1实验材料

7、及来源（略）　　1～7号为山东产瓜蒌的农家栽培品种，原植物为栝楼Trichosantheskirilo.，8号为栝楼野生种的果实，9号为湖北栝楼TrichosantheshupehensisC.Y.ChengetYueh的果实　　1.2.3染色将胶板浸于考马斯亮蓝染色液中，在恒温培养箱内37℃染色1～2h，至谱带清晰，后用蒸馏水漂洗，再放入脱色液（0.5mol/L的NaCl水溶液）中约2h，直至谱带背景清晰。　　1.2.4指纹图谱分析电泳胶板用凝胶成像紫外分析仪进行拍照，复日FR980A生物电泳图像分析系统分析，以泳道中各谱带的光密度值OD为

8、纵坐标，谱带位置POS为横坐标绘制指纹图谱。　　2结果　　瓜蒌不同农家栽培品种、野生种以及对照湖北栝楼种子蛋白电泳谱带见图1；指纹图谱见图2。由图可以看出，瓜蒌不同