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1、甘草总黄酮与石见穿总酚酸联用促肝星状细胞凋亡作用【摘要】目的研究甘草总黄酮与石见穿总酚酸联用对氧化应激的肝星状细胞(HSC)的促凋亡作用。方法MTT法检测甘草总黄酮与石见穿总酚酸联用对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)增殖的影响。次氮基三乙酸铁与HSC-T6体外共培养建立氧化应激模型,采用TBA法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,运用邻苯酸酚自氧化速率法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性。荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧水平。荧光染料Hoechst33258观察细胞的形态及凋亡情况。JC-1检测细胞内线粒体膜电位变化情况。结果甘草总黄酮与石见穿总酚酸联合处理HSC-T6后,细胞的增殖受到抑
2、制,并促进HSC-T6凋亡;细胞内线粒体膜电位下降;随着药物剂量的增加细胞内活性氧含量下降。结论甘草总黄酮与石见穿总酚酸联用促进氧化应激的HSC凋亡,此作用可能与线粒体凋亡途径有关。【关键词】甘草总黄酮;石见穿总酚酸;肝星状细胞;凋亡;线粒体膜电位 Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofGlycyrrhizauralensisflavonoidsandsalvianolicacid(GS)ontheapoptosisofHSC-T6cells.MethodsHSC-T6etricmethodandtrypanbluestainingeasure
3、thecellproliferentiationandsurvivalrate.Productionofreactiveoxygenspecies(ROS)ofdrug-treatedcellsonitoredbyafluorescentprobe2’,7’-dichlorodihydrofluorescinfluorescence(DCFH-DA).Morphologicalchangesassociatedinedbystainingitochondrialtransmembranepotentialindebythedual-emissionpotential-sensitivepr
4、obe5,5',6,6'-tetra-chloro-1,1',3,3'-tetraethyl-imidacarbocyanineiodide(JC-1).ResultOxidativestressdecreasedtheactivityofSODinHSCs,increasedthecontentofMDAinHSC-T6.GSinhibitedthecellsproliferationanddecreasedtheiROSlevelsinadosedependentmanner,After24hourstreatmentorphologyicratioandtheincreaseofki
5、dney-shapenuclearcells.Furthermore,GSinducedaconcentrationdecreaseinROSproductionandinmitochondrialmembranepotential.ConclusionGSplayanimportantroleinoxidativestressHSC-T6apoptosisaybecorrecteditochondriaapoptosispathitochondriamembranepotential 肝纤维化(hepaticfibrosis,HF)是慢性肝病的共同病理学基础,其中25%～40%最终发展
6、为肝硬化甚至肝癌[1]。目前认为,肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSC)是HF细胞外基质的主要细胞,HSC的活化和功能的改变是HF形成的关键[2-3],也是抗纤维化研究的核心。越来越多的实验表明,氧化应激是不同原因引起的HF发生的共同通路。实际上,铁负载、乙醇、四氯化碳和丙型肝炎病毒等引起HF的病因都可通过氧化应激和脂质过氧化途径激活HSC。Iredale等[4]的实验表明,激活的HSC主要不是通过转化为静止的HSC实现的,也并非引起坏死,因为纤维间隔及其邻近区域没有坏死及炎症的表现,而是凋亡的结果。在急性或慢性肝损伤修复的动物模型中也发现了HSC的凋亡。由激活的H
7、SC分泌的金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)的表达减少,解除了对胶原酶活性的抑制使胶原降解增加,再加上HSC的减少使细胞外基质的分泌减少,两个原因使细胞外基质降解[4-6]。那么,有针对性地诱导人HSC发生凋亡为HF的治疗提供了实际目标。本课题建立大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)的氧化应激模型,着重研究抗氧化剂甘草总黄酮与石见穿总酚酸联合用药(GS)能否促使氧化应激的HSC凋亡,并探讨凋亡是否与线粒体凋亡途径有关。 1材
