干扰素α对u937細胞的促凋亡和抗增殖作用及其

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1、干扰素α对U937細胞的促凋亡和抗增殖作用及其【摘要】为了研究干扰素α对白血病细胞U937細胞的抗增殖作用及其机制，用不同浓度的干扰素α(500U/L、1000U/L、2000U/L、3000U/L、4000U/L)对U937細胞作用不同时间（0、12、24、36和48小时）,用MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，RTPCR方法分析cyclinEmRNA的表达。结果表明：不同浓度的干扰素α处理细胞后，U937细胞生长明显受抑，2000U/L干扰素α能引起细胞凋亡，凋亡率为25.28%-70.54%（P<0.01），细胞周期相

2、关基因cyclinEmRNA表达降低；干扰素α对U937细胞的抑制率,呈浓度时间依赖性。结论：干扰素α对U937细胞有明显抗增殖和促凋亡作用，此结果将为干扰素α在白血病临床治疗方面的应用提供有力的实验证据。【关键词】干扰素αU937细胞白血病ApoptosisinducingandAntiproliferationEffectofInterferonαonU937CellsandItsMechanismAbstractThisstudyedtoinvestigatetheantiproliferationeffectofinterferonα(IFN

3、α)onleukemicU937cellsanditsmechanism．TheU937cellse(0,12,24,36,48hours),theinhibitoryratioeasuredbyMTTassay,apoptosisrateetry(FCM),theexpressionofcellcycleassociatedcyclinEmRNAeasuredbyRTPCR.TheresultsshoRNAexpressiondecreased,thegroeanddosedependentmanner．ItisconcludedthatIFNαhasa

4、pparentantiproliferationandapoptosisinducingeffectsonU937cells.Theseresultsiatherapy.Keyia干扰素α是目前用于临床治疗最重要的细胞因子之一。它具有广泛多变的生物学作用，诸如免疫调节、抗感染、抗病毒作用，尤其是对病毒性肝炎具有良好的治疗作用［1］。最新研究表明，干扰素α是一种非常有效的抗肿瘤细胞因子，并且对许多恶性疾病，例如肺癌、慢性粒细胞白血病均有显著效果［2］。干扰素α虽然已经广泛用于各种恶性肿瘤，但其抗肿瘤机制还不清楚。干扰素α可能间接地通过调节免疫调制和抗血管生长反应

5、或直接通过影响肿瘤细胞的增殖和细胞分化来介导抗肿瘤作用。干扰素α的直接和间接作用都是由干扰素刺激基因（IFNtimulatedgene,ISG)亚群诱导引起的。除此之外，还有ISGS还具有致凋亡作用［3，4］。为了阐明干扰素α的抗白血病机制，我们研究了从500U/L-4000U/L的各种浓度干扰素α在体外对U937细胞的抗增殖作用和促凋亡作用，并检测细胞周期相关基因cyclinEmRNA的变化，为干扰素α的白血病临床治疗提供实验证据。材料和方法药物干扰素α购自基因公司。U937细胞购自中国细胞培养中心。cyclinE抗体购自晶美公司。细胞培养人类白血病细胞

6、U937细胞株接种于含有10%灭活的胎牛血清、青霉素100U/ml及链霉素100U/ml的RPMI1640培养液中，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养,每2周传代1次并常规检查是否有支原体污染。中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(1)干扰素-α对U937細胞的抗增殖作用及其机制细胞增殖抑制率的MTT比色法检测取对数生长期的U937细胞,调整细胞浓度为5×105/ml，置于96孔培养板,每孔加入上述细胞悬液100μl。将不同浓度的干扰素α（500、1000、2000、3000及4000U/L）加入不同的孔中,另选1组作为对照组。每种药物浓度为1

7、组,每组设6个平行孔。培养12、24、36和48小时后从培养箱中取出96孔培养板,然后每孔加入MTT(5mg/ml)10μl,再培养4小时后取出,离心吸去上清液,每孔加入DMSO100μl,充分溶解。选择490nm波长，酶联免疫检测仪上测定各孔A值。计算公式为：肿瘤细胞的生长抑制率=（1-实验组平均A值/对照组平均A值）×100%。细胞凋亡的流式细胞术检测收集经不同浓度干扰素α、不同处理时间的U937细胞,以PBS缓冲液清洗后再将细胞沉淀充分混匀,用PBS缓冲液重悬,加入200mg/L去DNA酶的RNA酶,流式细胞仪分析不同DNA含量的细胞分布。应用Modif