当归对宫内缺氧后新生大鼠大脑ca3区神经元及nmdar1mrna表达的影响

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1、当归对宫内缺氧后新生大鼠大脑CA3区神经元及NMDAR1mRNA表达的影响：陈旭东，赵四敏，华新宇，余鸿【摘要】　　目的探讨当归对宫内缺氧后新生大鼠大脑内N-甲基D-天冬氨酸受体亚单位NR1(NMDAR1mRNA)表达及神经元的影响。方法将孕期14d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组。缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天1次经尾静脉注射生理盐水8ml/kg（连续7d），后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2h（连续3d：孕期第14天、15天、16天）；当归治疗组用250g/L的当归注射液代替生理盐水，其余处理同缺氧组；对照组不缺氧，其余同缺氧组。三组孕鼠分娩当日取脑

2、组织、多聚甲醛固定，石蜡包埋切片NSE免疫组化、NMDAR1原位杂交神经元DAB显色、400倍拍照、IPP6.0软件图像分析。结果缺氧组新生鼠NSE阳性细胞表达较对照组减少(P＜0.05)，而NMDAR1mRNA的表达较对照组增加(P＜0.05)；当归组NSE阳性细胞表达较缺氧组增加(P＜0.05)，而NMDAR1mRNA的表达较缺氧组减少(P＜0.05)。结论当归注射液对宫内缺氧新生大鼠脑组织具有保护作用，其作用机制之一可能是与抑制NMDAR1表达有关。【关键词】当归；缺氧；脑；NMDAR1　　宫内缺氧是影响胚胎发育的常见因素，也是导致新生儿残疾和死亡的主要原因之

3、一。然而，损伤后的神经系统能否及时修复、如何修复等显得非常重要。本小组前期研究表明当归可减弱缺氧时神经元的变性［1］，但是其机制如何？近年来研究发现，NMDA受体是兴奋性氨基酸的特异性受体，也是兴奋毒性的主要神经通路，从而发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用。但NMDA是否也参与宫内缺氧新生大鼠的神经系统的改变，其又扮演了怎样的角色？本实验试图建立在体宫内缺氧模型，预观察神经元的和NMDA的变化，以及当归对其是否有调控作用并探讨其可能机制。　　1材料与方法　　1.1材料小鼠抗NSE（CHEMICON公司）、NMDAR1原位杂交检测试剂盒、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒

4、(棕黄色)购自武汉博士德生物工程公司；250g/L的当归注射液购自武汉大学附属第二医院药剂科（批号：070823）；OLYMPUSBx-70荧光显微镜成像系统为日本OLYMPUS光学仪器有限公司生产；德国莱卡切片机；三气培养箱（购自美国REVCO公司）。SD大鼠15只（220～250g）由泸州医学院动物实验中心提供。　　1.2动物配种与分组成年健康SD雌大鼠15只(体质量220～260g)，分别与SD雄鼠合笼配种，次日晨见阴栓记为大鼠怀孕0d，孕鼠随机分为对照组、缺氧组、当归组各5只。　　1.3宫内缺氧模型建立当归组孕鼠自孕14d开始，每天上午8：00经尾静脉注射2

5、50g/L的当归注射液8ml/kg（孕14～20d，连续7d），1h后放入三气培养箱(氧体积分数130ml／L，温度25℃，二氧化碳体积分数0.4～0.6ml／L)内缺氧2h，连续缺氧3d(孕第14～16天)，第17天、18天、19天、20天仍给予当归注射，但不缺氧。缺氧组用生理盐水代替当归注射液，其余同当归组。对照组不缺氧，余同缺氧组。　　1.4取材、石蜡切片及NSE免疫组织化学和NMDAR1原位杂交测定每只孕鼠分娩当天随机选取新生大鼠2只，每组得新生鼠10只，取新生大鼠脑、40g／L多聚甲醛固定60min、常规石蜡包埋（试剂中均含1ml/L的DEPC）、经海马冠

6、状切面切片(厚4μm)。脑组织切片作NSE免疫组化、NMDAmRNA原位杂交（步骤按说明书进行），切片常规脱水、透明、封片。采用OLYMPUSBx-70荧光显微镜成像系统拍照，经Image-ProPlus5.1图像分析系统对阳性细胞进行图像分析。　　1.5统计学处理各组间比较用方差分析，两两比较用LSD法检验。采用SPSS15.0软件包完成数据分析（P<0.05）。　　2结果　　2.1各组新生鼠脑CA3区NSE免疫组化染色结果对照组NSE免疫组化阳性细胞分布于锥体细胞层，分子层，多形细胞层，胞质染为棕黄色（见图1）；与对照组相比缺氧组阳性细胞染色减弱，数量减少

7、（见图2）；与缺氧组相比当归治疗组阳性细胞染色增强，数量增多（见图3），各组积分光密度值见表1。表1各组新生大鼠NSE和NMDAR1mRNA阳性细胞IOD值（略）　　2.2各组新生鼠脑CA3区NMDAR1mRNA原位杂交结果NMDAR1mRNA原位杂交阳性细胞分布在锥体细胞层，分子层，多形细胞层，胞质染为棕黄色，对照组阳性细胞浅染，数量少（见图4）；缺氧组阳性细胞染色明显增强，数量较对照组增多（见图5）；当归组阳性细胞染色较相应缺氧组减弱，数量减少（见图6），各组积分光密度值见表1。　　　3讨论　　由于众多因素（如母体因素、脐带因素、胎儿因素等）的普遍存在，导致