当归对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞增殖的影响论文

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1、当归对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞增殖的影响论文陈旭东，钟小明，陈东丽，赵峰，梅欣明，余鸿【摘要】目的探讨宫内缺氧对新生大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液的保护作用。方法将孕期14d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组。缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天一次经尾静脉注射生理盐水8ml/kg（连续7d），后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2h（连续3d：孕期第14，15.freelcells(NSCs)fromnealeSDratslyintothreegroups:controlgroup(CG),hypoxiagroup(

2、HG)andAngelicagroup(AG)alSalinethroughcaudalveins(l/kg.d)beforeintrauterinhypotonichypoxia(alSalineeastheHG.NoadministrationofhypoxiaedintheCG.Theirbraintissuesofnerutsestedimmediatelyofnepusofnemunohistochemistryandtheresultsageprocessingsystem.ResultsIODofnestinpo

3、sitivecellsinHGulatetheproliferationoftheNSCsAngelicainjectioncanplayaprotectiveroleonNSCsfromnecell；Proliferation宫内缺氧是胚胎发育中的常见症，是造成脑瘫、癫痫及智力发育迟缓或智力低下的重要原因，神经系统是胚胎发育中出现最早的系统之一，因此研究宫内缺氧对神经干细胞的影响具有重要意义。目前国内外神经干细胞增殖的研究多是在体外状态下进行的，在体的研究大多集中在对生后7～14d的新生鼠夹闭颈总动脉，给予低氧干预。本实验试

4、图通过建立宫内缺氧模型，观察在体状态下缺氧对新生大鼠神经干细胞增殖的影响，并观察中药当归对缺氧状态的调节，为临床长期观察宫内缺氧对新生鼠的影响和治疗宫内缺氧提供实验和理论依据。1材料与方法1.1材料nestin单克隆一抗购自（CHEMICON公司）、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒(棕黄色)购自武汉博士德生物工程公司；250g/L的当归注射液购自武汉大学附属第二医院药剂科（批号060926）；OLYMPUSBx-70荧光显微镜成像系统为日本OLYMPUS光学仪器有限公司生产；德国莱卡切片机；三气培养箱（购自美国REVCO公司）

5、，SD大鼠15只（220～250g）由四川泸州医学院动物科提供（为一级合格动物，许可证号：川实动管质第17号）。1.2动物配种与分组将成年发情期SD雌大鼠15只分别与一只雄鼠合笼饲养，次日8：00见阴栓记雌鼠怀孕0d，至孕期14d。孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组各5只（每只孕鼠产新生鼠5～8只）。1.3动物实验缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天1次经尾静脉注射生理盐水8ml/kg（连续7d），后用设置好的三气培养箱（氧浓度15%，温度25℃）致胚鼠宫内缺氧2h（连续3d：孕期第14，15，16天）；当归治疗组用250g/L

6、的当归注射液代替生理盐水，其余处理同缺氧组；对照组不缺氧，其余同缺氧组，孕鼠分娩后立即取新生鼠大脑组织，经40g/L的中性甲醛固定。1.4石蜡切片与免疫组织化学每组随机选取20个新生鼠大脑，然后进行常规石蜡包埋，经海马冠状切面切片（片厚4μm），切片脱蜡至水，各切片作nestin(1∶200）免疫组化染色(常规链酶亲和素生物素过氧化物酶复合物法)。1.5结果分析与判断用OLYMPUSBx-70荧光显微镜成像系统观察每一切片，每张切片均以海马CA3区为观察目标，200×下照相。胞质染成棕色的就是神经干细胞，每例新生鼠选一张切

7、片，每张切片均选海马CA3区在200×下观察1200个像素（20个像素代表1μm）线性长度，用Image-ProPlus图像分析软件分析所选线性长度内组织的积分光密度（IOD），结果以±s表示。1.6统计学分析各组间比较用方差分析，两两比较用LSD法检验。统计处理用SPSS13.0软件完成。2结果对照组：nestin免疫组化反应阳性细胞质染色棕黄色，细胞稀疏，成一带状分布（图1）。缺氧组：nestin免疫组化反应阳性带细胞密集，细胞带两侧即海马皮质和髓质细胞的数量明显增多（图2），其积分光密度（IOD）值增大，与对照组相比有显

8、著性差异（P＜0.05）（表1）；当归治疗组：nestin免疫组化反应阳性细胞的分布与缺氧组相似，但与缺氧组相比，阳性细胞的染色明显减弱（图3），其积分光密度（IOD）值减小（P＜0.05）。见表1。表13组新生鼠海马CA3区nestin阳性细胞积分光密度（IOD）值(略)3