电离辐射对人鼻咽癌细胞株cne2z体外表达血管内皮生长因子的影响

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1、电离辐射对人鼻咽癌细胞株CNE2Z体外表达血管内皮生长因子的影响【关键词】电离辐射；鼻咽癌细胞；血管内皮生长因子　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofionizingradiation(IR)onvascularendothelialgroacells.MethodsE2ZnasopharygealcarcinomacellsaintainedinRPMI1640mediumandexposedtoIRinincrementaldosesof2,4,6,8,12,16Gy.Thesecellseafterexposu

2、re,andthemediaeasurementofVEGFproteinlevelsbyELISA.ResultsExposureofE2ZcellstoIRinducedsignificantupregulationofVEGFexpression.VEGFlevelsexhibitedanIRandtimedependentincreaseinparisonediatedinductionofVEGFinnasopharyngealcarcinomacellsmaycontributetoclinicallytumourradioresistance.　　【

3、Keya,VEGF　　鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一，放射治疗是其首选的治疗手段，局部复发和远处转移仍是治疗失败的主要原因。恶性肿瘤的生长和转移依赖于血管生成，血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrol单细胞悬液，2ml/孔接种于六孔板中，待细胞贴壁后（约12h），采用Siemens直线加速器6MeVX射线，吸收剂量率2Gy/min，源皮距100cm，射野大小10cm×20cm，从下向上照射。实验分为两组：剂量梯度组分别给予0、2、4、6、8、12、16Gy照射；时间梯度组给予6Gy照射。　　1.2条件培养液的收集剂量梯度组于照射后24h，时间梯

4、度组于照射后0、12、24、36、48h时间点终止培养，收集细胞培养液，转移至1.5mlEppendorf管，4℃，2000r/min离心5min，吸取上清液-20℃冷冻保存备用。　　1.3条件培养液VEGF浓度的测定采用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液VEGF。人VEGFELISA试剂盒购自中杉生物工程公司，具体操作按说明书进行。　　1.4数据分析与统计实验数据资料统计采用统计学软件SPSS10.0进行单因素方差分析。　　2结果　　　　不同剂量射线照射24h后，E2Z细胞VEGF的表达均增高。4Gy时最高，后随剂量的增加有所下降，与对照组0Gy比较，差异均有显著性

5、（P<005），见表1。　　表1不同剂量照射24h后E2Z细胞培养液中VEGF浓度　略　　6Gy照射后，各时间点条件培养液中VEGF的含量逐渐升高，36h时与0h比较，差异有显著性（P<0.01），到48h时达最高水平,与对照组0h时比较，差异有极显著性（P<001），见表2。　　表2照射后不同时间E2Z细胞培养液中VEGF浓度6Gy照射后时间（略）　　3讨论　　　　放射治疗失败的主要原因有肿瘤细胞的放射抵抗性、肿瘤细胞的远处转移等。低氧是导致肿瘤放射抵抗的一个重要原因［2］，低氧能诱导肿瘤细胞表达VEGF，放射也可以诱导VEGF的高表达［3，4

6、］。肿瘤细胞产生的VEGF不仅以旁分泌方式刺激血管生成，而且以自分泌方式刺激肿瘤细胞自身的生长。VEGF可能在肿瘤细胞以及肿瘤血管内皮细胞经过放射损伤后的修复过程中发挥一定的作用［5］。放射治疗不仅对肿瘤细胞有直接或间接杀伤作用，还具有封闭肿瘤血管的作用，可使血管内皮细胞退化、变性。随着肿瘤缩小，肿瘤微血管更加迂曲、变形、管腔缩小，血流缓慢，血栓形成，使肿瘤微血管进入封闭状态［6］。然而，已有文献报道，放射治疗本身也可引起肿瘤血管生成活跃，VEGF分泌增加［7~9］。其机制可能是：①肿瘤细胞受照射的应激保护性反应。②电离辐射激活转录所需的PKC（蛋白激酶C）信号转导系统，

7、促进VEGF等多种细胞因子表达。③放射治疗还可以激活EGFR，通过MAPKS信号传导通路，调节TGFα、VEGF等生长因子表达增加。④放射治疗还直接激活MAPKS，应激相关蛋白激酶和ras相关激酶等改变细胞增殖状态，使肿瘤细胞得以生存。放射治疗促进VEGF表达和血管生成，无效的血管生成使乏氧细胞增加，乏氧细胞增加又促进血管生成，如此恶性循环，最终导致肿瘤对放射治疗产生抗性。Gorski等［10］研究证实Leorradioresistance［J］.CancerJ,2002,8(1):4754.　　［2］　BrizelDM