莪术油对人乳腺癌mcf7细胞凋亡及bcl2、bax表达的影响

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1、莪术油对人乳腺癌MCF7细胞凋亡及Bcl2、Bax表达的影响【关键词】乳腺癌莪术油MCF7细胞Bcl2Bax　AbstractObjective:ToinvestigatetheeffectsofZedorayTurmericOiloninducingapoptosisofMCF7cellsandtoexplorethepossiblemechanismofitsaction.Methods:DifferentconcentrationsofZedorayTurmericOilofMCF7cells.Prol

2、iferationandapoptosisofMCF7cellsmunocytochemistry,andfloetryquantitativeanalysis.TheexpressionofBcl2andBaxproteininedbyqualitativeanalysis.Results:ProliferationofMCF7cellsericOil.TherateofapoptosisincreasedastheincreaseintheconcentrationofZedorayTurmericOil.Th

3、eexpressionofBcl2entalgroups,ericOilcaneffectivelyinhibitproliferationofandpromoteapoptosisofMCF7cells;themechanismmaybecorrelatedtotheupregulationofBaxanddoericOilMCF7Bcl2Bax　　莪术是我国传统中药之一，是姜科草本植物莪术、郁金的根茎，味辛、苦，性温，归肝、脾经，具有行气破血、消积止痛的功效。莪术油(zedoaryturmericoil)是

4、莪术中提取的挥发油，含有多种抗肿瘤有效成分。对多种实体肿瘤(如子宫内膜癌、宫颈癌、白血病、肺癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌等)有较强的抑制作用[1]，而且具有抗血栓、抗病毒、抗菌和增强免疫等功能[24]。张瑾峰等[5]发现，莪术与三棱联合应用具有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。本研究通过一定浓度的莪术油作用乳腺癌细胞系MCF7后，观察其对MCF7细胞的凋亡诱导效应，并通过对与凋亡相关的Bcl2和Bax蛋白表达变化的检测，探讨莪术油对MCF7细胞凋亡诱导的作用机制。　　材料与方法　　1.1材料及仪器　　人乳腺癌MCF7细胞

5、株(厦门大学生命科学学院提供)。莪术油注射液(徐州莱恩药业有限公司，国药准字：H20067076)，配制为20g/L的无菌溶液备用。RPMI1640、二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝(MTT)(北京中杉金桥生物技术有限公司)。鼠抗人Bcl2、Bax单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。流式细胞仪(美国GENE公司)。实验时选用对数生长期细胞。　　1.2MTT法生长曲线测定　　取对数生长期的MCF7细胞，消化后制成细胞悬液，调整细胞浓度为1×104个/ml，接种于96

6、孔培养板上，每孔加200μl细胞悬液，培养24小时后，加入不同浓度的莪术油(0.15、0.25、0.35、0.50、1.0mg/ml)，另设对照组(不加莪术油)和空白对照组(只加培养基)，每组设7个复孔，分别于加药后1、2、3、4、5、6、7、8和9天时加MTT(5mg/ml)20μl，孵育4小时后，加入二甲基亚砜200μl，避光振荡10min，酶标仪在570nm处测定各孔吸光度(OD)值，取平均值，以时间为横坐标，OD值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。　　1.3流式细胞仪检测凋亡　　不同浓度的莪术油(0.15、0.25、0

7、.35、0.50、1.0mg/ml)分别作用于贴壁生长的MCF7细胞72小时后，胰酶消化，吹打脱落，使细胞分散良好，1500r/min离心5min，弃上清，加1×缓冲液200μl。各管中分别加入AnexinV4μl和PI5μl，用1×缓冲液将终体积配成250μl，冰浴，上机检查。以不加莪术油培养72小时的MCF7细胞作为阴性对照。　　1.4免疫细胞化学染色　　将对数生长期的MCF7细胞6瓶(细胞数>1×105/瓶)随机分为对照组和实验组，每组3瓶。实验组用含0.35mg/ml莪术油的培养基培养，对照组正常培养

8、，48小时后终止培养。随机从对照组和实验组各取1瓶细胞，用0.2%胰酶消化后收集细胞，做细胞涂片。4℃丙酮固定20min，1XPBS洗3次，每次5min。自然干燥后，按PV9000试剂盒要求，行Bcl2和Bax免疫细胞化学染色，并分别设立阴性与阳性对照。结果判定：Bcl2和Bax阳性细胞为胞质染为黄色或棕黄色，