复方白毛夏枯草免疫调节作用的实验研究

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1、复方白毛夏枯草免疫调节作用的实验研究：王文佳，李海峰，欧江琴，田维毅【摘要】目的探讨复方白毛夏枯草对实验小鼠免疫功能的影响。方法实验小鼠随机分为复方白毛夏枯草大、中、小剂量组和生理盐水对照组，给予相应的药物及生理盐水灌胃7d后，测定胸腺指数、脾脏指数、EA花环形成率、吞噬细胞吞噬中性红的能力、脾淋巴细胞转化能力、血清IgG及IgM含量。结果与生理盐水对照组比较，复方白毛夏枯草各组小鼠的胸腺及脾脏指数无明显差异（P＞0.05）；腹腔巨噬细胞的数量明显增加（P＜0.05），同时吞噬能力也明显增强（P＜0.05或P＜0.001），以中、大剂量用药组最显著；血清中免疫球蛋白IgG的含量明显升

2、高（P＜0.05或P＜0.01），大剂量用药组含量最高，而血清中免疫球蛋白IgM的含量无明显变化（P＞0.05）；脾脏淋巴细胞增殖能力有显著提高（P＜0.01或P＜0.05或P＜0.001），以大剂量用药组增殖最显著。结论复方白毛夏枯草对实验小鼠免疫功能总体上表现为增强效应。【关键词】复方白毛夏枯草；小鼠；免疫调节复方白毛夏枯草由苗药白毛夏枯草、麦冬等组成，具有清热解毒、止咳化痰、消肿润肺之功，是贵州省少数民族用于治疗上呼吸道感染的经验方，对上呼吸道感染引起的发热、咽痛、久咳不止等症效果尤为明显。为探索该方的临床疗效机制，笔者对其免疫调节功能进行初步研究，为其临床应用提供药理学依据。

3、　　1材料与仪器　　1.1动物及分组　　健康昆明种小鼠120只,体质量(20±2)g,雌雄不分,贵阳医学院实验动物中心提供,合格号为SCXK（黔）2002-0001。随机将小鼠分为4组，即复方白毛夏枯草大剂量组、中剂量组、小剂量和生理盐水对照组，每组30只，雌雄分笼饲养。　　1.2仪器与试剂　　USA3131型CO2培养箱（美国热电），EIX808U型全自动酶标仪（美国BioTek）、BSC1800-Ⅱ-A/B3型生物安全柜（上海瑞仰），小鼠IgG、IgM酶联免疫试剂盒（批号分别为080418、080110,上海门谍塔生物科技发展有限公司）；四甲基偶氮唑盐(MTT)（Phamacia

4、公司），植物血凝素（PHA）（Sigma公司），RPMI-1640营养液（Serva公司），中性红(Amresco公司),兔抗羊红细胞抗体（A）（河南知微生物工程有限公司），10%绵羊红细胞悬液（E）、3%硫乙醇酸钠溶液，Hank，s液，以上试剂均按常规方法配置。　　2方法　　2.1药物及给药方法　　将复方白毛夏枯草各药材依验方比例配伍，常规制备水煎剂，按成人临床用药量换成小鼠用药量，调整浓度为大、中、小3个剂量（分别相当于生药1，0.5，0.25g/ml）备用。各给药组小鼠每次分别按10，5，2.5g/kg灌服复方白毛夏枯草水煎剂，对照组代以等量生理盐水，2次/d，连续灌胃7d。所

5、有动物按常规饲养。　　2.2免疫指标检测　　2.2.1胸腺指数、脾脏指数检测　　给药结束次日，各组随机取小鼠10只，摘眼球无菌取血并分离血清备用；同时，脊椎脱臼处死小鼠后，取胸腺、脾脏称湿重并计算胸腺和脾脏指数［胸腺或脾脏质量(g)与每100g体质量的比值］。　　2.2.2EA花环法测定巨噬细胞FC受体　　　实验按照文献方法进行［1］。在显微镜下，以周围粘附5个或5个以上EA的巨噬细胞为EA花环阳性,随机计数200个巨噬细胞，算出EA花环阳性百分率。　　2.2.3ELISA测定血清IgG、IgM含量　　　　使用上述血清0.1ml,按照ELISA试剂盒操作说明测定小鼠血清中IgG、Ig

6、M量。　　2.2.5MTT比色法测定脾脏淋巴细胞增殖能力　　参考文献方法［3］。各组剩余小鼠末次给药后2h,无菌取脾细胞，常规制备小鼠脾细胞悬液,并调整浓度至2×106/ml，加至96孔培养板中l00μl/孔,再加入含3%PHA完全RPMI-1640培养液100μl/孔,另设对照组加入不含PHA的完全RPMI-1640培养液100μl/孔，每个样品设3个复孔，置37℃、5%CO2培养箱中贴壁培养72h，吸上清液50μl弃之,加入5mg/ml的MTT10μl/孔,置CO2培养箱孵育6h后,加入DMSO100μl/孔，充分振荡后,静止10min,置酶标仪570nm处测定各孔OD值,淋巴细

7、胞增殖能力用PHA+与PHA-的OD均值差表示。　　2.3统计学处理　　　各组均数用±s表示，组间差异用SPSS11.5软件进行单因素方差分析。　　3结果　　3.1胸腺指数、脾脏指数　　与生理盐水对照组比较，复方白毛夏枯草各组小鼠胸腺指数和脾指数均无明显差异（P＞0.05）。见表1。表1复方白毛夏枯草对小鼠免疫器官的影响（略）　　3.2巨噬细胞FC受体　　与生理盐水对照组相比，复方白毛夏枯草小剂量组小鼠巨噬细胞FC受体的EA花环形成率无明显差异(P＞0.0