β┐胡萝卜素对病毒转化细胞的影响

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1、β┐胡萝卜素对病毒转化细胞的影响【关键词】,β-胡萝卜素关键词:β-胡萝卜素;293细胞;Raji细胞摘要:目的探讨β-胡萝卜素（β-C）对病毒转化细胞的抑制作用.方法体外培养人腺病毒转化的293细胞和EB病毒转化的Raji细胞，培养时添加0，10，50和100μmolL-1的β-C作用24，48和72h后，进行细胞计数，测定细胞生长抑制率;ELISA-结晶紫方法测定A值，计算细胞存活量;采用快速CPE（细胞病变）方法测定复制缺陷型腺病毒在293细胞上的病毒滴度.结果10～100μmolL-1的β-C对293细胞和Raji细胞均有抑制作用，细胞存活量减少，抑制率分别是15.6%，1

2、0.1%（10μmolL-1）;19.7%，22.4%（50μmolL-1）和33.6%，29.3%（100μmolL-1），P<0.05.快速CPE结果显示加入β-C后，复制缺陷型腺病毒在其辅助细胞-293细胞上的复制增殖能力明显下降，病毒滴度降低，空斑形成单位（×109pfuL-1）分别为98±41（10μmolL-1），75±29（50μmolL-1）和63±31（100μmolL-1），与对照组185±25（0μmolL-1）相比，P<0.05.结论β-C对病毒转化的293细胞和Raji细胞的生长增殖具有明显的抑制作用，对293细胞内整合的腺病毒早期基因E1的表

3、达具有下调作用.　　Keyedcells.METHODSHumanadenovirustransforming293cellsandEBvirustransformingRajicellsediumcontaining0，10，50and100μmolL-1beta-carotenefor24，48and72h.Cellsethodethodeasurethetiterofreplicate-defectadenovirusin293cells.RESULTSBeta-caroteneatconcentrationsof10～100μmolL-1inhibitedsignifica

4、ntlytheproliferationof293cellsandRajicells（P<0.05）.InhibitionpercentagesolL-1），19.7%，22.4%（50μmolL-1）and33.6%，29.3%（100μmolL-1），respectively.Thesurvivalcellsdecreasedobviously.Thetiterofreplicate-defectadenovirusin293cellsdroppedsignificantly（P<0.05）.Plaqueformationunit（×109pfuL-1）olL-1）

5、，75±29（50μmolL-1）and63±31（100μmolL-1），respectively.CONCLUSIONBeta-carotenecaninhibitproliferationof293cellsandRajicellsanddogL-1，牛血清100mLL-1，pH7.0.Raji细胞的培养基为RPMI1640.　　1.2方法　　1.2.1细胞生长抑制率的测定取对数生长期细胞分散计数后，分别加入不同浓度β-C（0，10，50和100μmolL-1）进行培养，并在24，48和72h作细胞计数，每组3瓶，计数2次，取平均值，计算细胞生长抑制率.　　细胞生长抑制率=（

6、对照组细胞数-实验组细胞数）/（对照组细胞数）×100%　　1.2.2细胞存活量测定取96孔细胞培养板，每孔加入处于对数生长期的含不同浓度的β-C细胞悬液，每孔200μL，设8个复孔，37℃培养3d，取平行板，按ELISA-结晶紫方法，在酶联仪上测A值，计算细胞存活量.　　1.2.3复制缺陷型腺病毒滴度测定取复制缺陷型腺病毒Ad5E1-（由解放军军需大学提供），以每细胞10个空斑形成单位（pfucell-1）的感染强度接种处于对数生长期的293细胞，单层吸附30min后，分别加入3mL含不同浓度的β-C培养液，48h后冻融收集病毒培养液（同一浓度β-C混合），采用快速CPE分析方法

7、测定各β-C浓度组Ad5E1-病毒滴度:即将293细胞接种于一块6孔培养板，接种量为2×106细胞孔-1，约24～36h后，细胞长至90.0%汇合状态，将各孔中的培养液吸出，分别加入102～106倍稀释的上述病毒液，培养1～2h后吸出，每孔加入2mL含100mLL-1胎牛血清的DMEM培养液;培养36～48h后观察CPE，选出发生100%CPE的稀释倍数，计算病毒感染滴度:病毒感染滴度（×103pfuL-1）=（2×106细胞孔-1）×（稀释倍数）×10病毒液体积