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1、HMGB1对淋巴细胞增殖、凋亡及Th1/Th2、Tc1/Tc2漂移的影响：王忠堂,姚咏明,盛志勇【摘要】 目的:探索HMGB1是否参与淋巴细胞免疫功能的调节。方法:系列浓度HMGB1单独或与ConA联合刺激培养小鼠脾淋巴细胞。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞表面CD3、CD8及细胞内IL-4、IFN-γ表达。结果:（1）HMGB1时间-剂量依赖性调节淋巴细胞增殖,而不影响其凋亡。（2）不同HMGB1浓度和刺激时间不影响淋巴细胞Th1、Th2及Th1/Th2变化,但10μg/L和100μg/LHMGB1刺激12~24h,T
2、h1亚群占优势;培养12~24h,淋巴细胞Tc1亚群明显减少,Tc2无变化。Tc1/Tc2变化显示,1μg/L和10μg/LHMGB1刺激,Tc1亚群占优势。（3）培养12~24h,上清中IL-2增加,sIL-2R减少,IL-2/sIL-2R比例升高20~50倍,尤以10μg/LHMGB1刺激明显。结论:低剂量HMGB1可增强淋巴细胞免疫功能。【关键词】高迁移率族蛋白B1淋巴细胞T细胞亚群白细胞介素-2 ［Abstract］AIM:ToexploreobilitygroupB1protein(HMGB1)playsaroleinregulation
3、oflymphocyte-mediatedimmune.METHODS:LymphocytesoriginatedfrommicespleensulatedphocytesphocytesandexpressionofCD3andCD8oncellssurfaceandIL-4andIFN-γetry.Levelsofinterleukin-2(IL-2)andsolubleIL-2R(sIL-2R)ofculturesupernatantphocytesinatime-anddose-dependentmanner,butdidnotinfluen
4、cetheapoptosisoflymphocytes.(2)TheratioofThtoTcincreasedfrom2.6∶1atculture-hour0to5-7:1atculture-hour12and24,butthatdidnotchangeulationofHMGB1.Thereulatedulatedarkedlyhigher,asparedprovethelymphocyte-mediatedimmune. ［Keyobilitygroupbox1;lymphocyte;T-lymphocytesubsets;interleuk
5、in-2 高迁移率族蛋白B1（highmobilitygroupbox1,HMGB1）为Mr30000的非组DNA结合蛋白,因其在凝胶电泳时泳动速度快而得名。近年研究发现,多种因素可诱导HMGB1从核内转移至胞外［1］,发挥典型促炎效应［2］。因较TNF-α、IL-1β等早期释放的炎性因子产生迟且持续高水平释放时间持久,国内外学术界将HMGB1称为“晚期”炎性介质［3］。既往炎性因子拮抗方案临床应用失败,促使人们把HMGB1等分泌较晚、体内持续时间较长、且与临床脓毒症患者死亡时相接近、临床治疗“窗口”较宽炎症因子作为新的干预目标［4］。目前,细胞外
6、HMGB1的功能研究多集中在其促炎效应方面,而尚无其与淋巴细胞增殖、凋亡及Th1/Th2和Tc1/Tc2漂移间关系的报导［5,6］。现已明确,淋巴细胞介导细胞免疫应答的性质和程度主要体现在某亚群细胞数量增减和分泌细胞因子类别及量的变化［7］。因此,试验重点观测HMGB1对体外淋巴细胞增殖、凋亡和IL-2、IL-4、IFN-γ等细胞因子分泌的影响,探讨HMGB1是否诱发免疫功能紊乱。 1材料和方法 1.1材料培养液RPMI1640为Gibco/BRL产品。HMGB1、刀豆素A、噻唑兰（MTT）、BrefeldinA、离子霉素、佛波醇乙酯（PMA）,
7、购自Sigma公司。抗小鼠单克隆抗体(mAb)CY-Chrome-CD3、FITC-CD8a、APC-IL-4及APC-RatIgG1同型对照、FITC-CD4、R-PE-IFN-γ及R-PE-RatIgG1同型对照,Ratanti-mouseCD16/CD32(FcγⅢ/Ⅱ-R)抗体,固定/破膜剂,均购自BDPharmingen公司。Annexin-Ⅴ细胞凋亡检测试剂盒为北京宝赛生物产品。小鼠IL-2检测ELISA试剂盒为法国Diaclone产品。小鼠sIL-2R检测ELISA试剂盒为美国LifekeyBiomeditech产品。流式细胞分析仪（F
8、ACS/Calibur）为Becton-Dickinson产品。 1.2方法 1.2.1淋巴细胞分离纯化
