电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构ｎｅｓｔｉｎ与ｂｒｄｕ表达的影响

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1、电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构Ｎｅｓｔｉｎ与Ｂｒｄｕ表达的影响[摘要]目的：通过观察电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构中神经上皮干细胞蛋白(Nestin)与5-溴-2-脱氧脲嘧啶(Brdu)表达的影响，了解电针对脑缺氧缺血后神经发生水平的干预，为电针穴位疗法的临床应用提供实验依据。方法：100只7日龄健康ethods:7daysoldDA含量下降，脑水肿程度亦有一定控制，提示脑缺血再灌流损伤有明显的预置性保护性作用。以上研究说明，电针刺激可提高脑的抗损伤能力，加快损伤修复。有关脑缺氧缺血新生大鼠电针穴位治疗后对受损脑组织发育的远期影响

2、则少有报道。本实验采用国际公认的新生大鼠HIBD模型，观察电针同时刺激“百会”、“大椎”两穴，应用免疫组织化学方法检测神经上皮干细胞蛋白(Nestin)和5-溴-2-脱氧脲嘧啶(Brdu)在大鼠脑内海马结构中的表达水平，以进一步明确电针穴位疗法对脑缺氧缺血后神经发生水平的干预作用，为电针治疗新生儿缺氧缺血性脑病及预防后遗症提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1实验分组及模型制作　　7日龄健康V)，留针10min，治疗2个疗程，每个疗程10d，两疗程间间隔2d，穴位定位、针刺参数及疗程参照文献[1,5,6]。24d后除模型判定组外各组

3、动物分别灌注取左侧脑组织，常规石蜡包埋、切片，行Nestin和Brdu免疫组化染色，光镜下观察海马结构的阳性细胞分布、计数定量分析，除模型判定组外各组动物于处死前2d的电针治疗前及处死前2h，分别注射Brdu以标记处于增殖状态的神经前体细胞。Brdu溶于0.01mol/LPBS中，注射前配制，按50mg/kg体重腹腔注射。　　1.3统计学方法　　数据以均数±标准差(x±s)表示。先对每组数据做正态性检验，再做方差齐性检验。若方差齐，则做单因素方差分析和q检验；若方差不齐，则进行变量转换。使用SPSS10.0统计软件对数据进行分析，P＜

4、0.05表示差异有统计学意义。　　2结果　　2.1TTC功能性酶组织染色　　模型判定组动物的脑片经TTC功能性酶组织化学染色后，其左侧大脑半球的大部分脑实质着色浅呈苍白色，而右侧大脑半球染成深红色，提示模型成功。　　2.2Nestin免疫组织化学染色　　高倍镜下(10×40倍视野)Nestin免疫阳性细胞呈纤维状，胞体较小，突起且较少，可见明显的锥状突起，染色较淡。细胞计数显示，脑缺氧缺血组和脑缺氧缺血后电针组海马CA1区Nestin免疫阳性细胞均较正常对照组增多，脑缺氧缺血后电针组海马CA1区Nestin免疫阳性细胞较脑缺氧缺血组增

5、多，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)（表1）。　　2.3Brdu免疫组织化学染色　　高倍镜下(10×40倍视野)Brdu免疫阳性细胞的细胞核呈棕黄色颗粒状，细胞计数显示，脑缺氧缺血组和脑缺氧缺血后电针组侧脑室的SVZ和齿状回Brdu免疫阳性细胞均较正常对照组增多，脑缺氧缺血后电针组侧脑室的SVZ和齿状回Brdu免疫阳性细胞较脑缺氧缺血组明显增多，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)（表2）。　　　　表2各组动物齿状回Brdu免疫阳性细胞数变化(x±s)　　组别例数(只)齿状回亚颗粒细胞层(个)F值P值　　空

6、白对照组2310.22±2.21　　缺氧缺血组2219.78±2.86*178.240.000　　缺氧缺血后电针组2424.04±2.58▲　　与空白对照组比较，*P<0.05，▲P<0.05；与缺氧缺血后电针组比较，▲P<0.05　　　　神经上皮干细胞蛋白(Nestin)是神经干细胞所表达的一种特异性标志物。在病理情况下，受损脑组织神经上皮干细胞蛋白(Nestin)表达水平，可作为监测神经干细胞发生水平的敏感性标志之一[9,10]。本研究显示，缺氧缺血组和缺氧缺血后电针治疗组CA1区神经上皮干细胞蛋白(Nestin

7、)免疫阳性细胞均较正常对照组增多，缺氧缺血后电针治疗组海马CA1区神经上皮干细胞蛋白(Nestin)免疫阳性细胞较缺氧缺血组明显增多，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)，提示电针刺激脑缺血缺氧大鼠“百会”和“大椎”两穴位可激发脑内海马CA1区神经干细胞增殖。　　Brdu(5-溴-2-脱氧脲嘧啶)是一种胸腺脱氧核苷类似物，在细胞的增殖周期S期即DNA合成期整合入细胞核DNA中，故Brdu是反映细胞增殖状态的理想标志物[11]。免疫荧光双染法显示，大多数Brdu免疫阳性细胞可同时拥有神经元特异标志物NeuN和成熟神经元特异标

8、志物Calbindin-D28K，该共存现象提示Brdu免疫阳性细胞大多数分化为成熟神经元，因此，Brdu免疫阳性细胞的数目基本可代表脑内神经前体细胞的发生水平[12]。本研究中各组动物齿状回Brdu免疫阳性细胞计数显示