电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区app与tau1蛋白表达的影响

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1、电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区APP与Tau1蛋白表达的影响徐振华许能贵符文彬刘健华【摘要】目的探讨电针对缺血后脑白质损伤的保护机制。方法采用热凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血模型，随机分为假手术组、缺血组和电针组，观察电针对脑缺血后6h缺血区淀粉样前体蛋白(APP)、Tau1蛋白的影响。结果电针组APP、Tau1蛋白的表达较模型组明显降低(P0.05)，与假手术组比较无明显差异(P>0.05)。结论早期电针对脑缺血后APP和Tau1蛋白表达的增多有明显的抑制作用，可减少缺血对脑白质的损伤。【关键词】电针;脑缺血;脑白质;APP;Tau1蛋白缺血性卒中是

2、脑白质急性缺血性损伤的重要因素，卒中后脑白质损伤是神经功能障碍的重要原因〔1〕。脑白质区损伤可破坏神经元之间、皮质和皮质下中枢之间的信号传递，临床上可表现为感觉运动功能、视觉空间技能、联想能力与精神运动功能下降〔2〕。脑白质区损伤也可造成其神经纤维投射区的灰质损伤，脑白质损伤主要表现为少突胶质细胞的损伤和髓鞘破坏。脑白质具有缺血易损性，少突胶质细胞和髓鞘化的神经纤维对缺血性损伤极为敏感，在神经元不可逆性损伤之前已有皮质下白质的改变〔3〕。长期以来，脑缺血的基础和临床研究多集中于神经元或灰质的损伤反应上，而一直忽视对脑白质损伤的研究〔4〕，但是脑缺血后神经功能的最终恢复

3、不仅依赖于对神经元和灰质的保护也有赖于对白质的保护。脑白质损伤有其独特的机制，因此有必要将脑白质损伤作为神经保护治疗的独立指标进行观察。脑缺血后受损的少突胶质细胞大量表达Tau1蛋白，轴突则表达淀粉样前体蛋白(APP)，因此可用免疫组化的方法对其进行标记〔5～7〕。本研究通过对脑缺血后轴突和少突胶质细胞的改变进行定量分析，探讨缺血后脑白质损伤及针刺的影响。　　1材料与方法　　1.1动物分组广州中医药大学动物实验中心SPF级m×25mm，苏州医疗用品厂生产)向后斜刺百会0.5寸(16.7mm)，直刺大椎0.5寸，两穴接上电针(G6805,上海华谊仪器厂生产)，用疏密

4、波，5～10次/s，强度以大鼠安静耐受为度，约2～3V，时间30min。其他两组大鼠在同等条件下饲养，未予任何处理。　　1.4观察指标与方法　　1.4.1神经运动功能体征的观察与评分标准3组大鼠造模后6h按时间段分别进行神经功能行为评分。评分标准参照Bederson和Belayev等〔10，11〕的方法，0分：行为完全正常，步态平稳;1分：提起鼠尾离开地面，非损伤侧前肢内旋、内收;2分：将大鼠置于地面，推动大鼠躯体检查两侧抗力，非损伤侧抗力下降;3分：将大鼠置于地面，观察其行走，只向一侧转圈;4分：无法站立或虽能站立但不能自行行走。评分越高，损伤越重。　　1.4.2A

5、PP、Tau1蛋白样品采集及处理6h后，随机取每组大鼠各6只用10%水合氯醛麻醉，心脏灌注固定，取脑组织放入4%多聚甲醛中，准备石蜡包埋及切片。大鼠脑组织石蜡包埋切片后进行相应的免疫组化染色。　　1.4.3免疫组织化学染色APP、Tau1蛋白的免疫组织化学染色均严格按说明书操作。　　1.5图像分析及统计学处理确定免疫标记的部位，应用ImagePlus6.0图像分析系统测定梗死周围区的光密度值(OD)，测定时首先明确阳性反应物的颜色范围，选定统一的色彩区域进行测量以避免非特异性染色所造成的误差，以OD除以照片面积算出平均光密度，进行半定量分析。数据以x±s表示，使

6、用SPSS11.5软件包中单因素ANOVA计算法和最小显著性差异(LSD)检验法来进行均数的显著性检验。　　2结果　　2.1神经症状行为学体征的变化假手术组大鼠神经行为学表现均正常，评分均为0分。大鼠的神经学评分6h后模型组为(2.38±0.52)分，电针组为(2.13±0.64)分，大鼠多表现为一侧前肢内旋或内收，侧向挤压时损伤对侧肌力下降，部分可以转圈行走或偶尔转圈行走。同时间段模型组和电针组与假手术组比较有显著差异(P0.001);模型组与电针组之间比较无明显差异(P>0.05)。　　2.2免疫组化检测APP的结果大鼠造模后6h缺血区皮质脑区APP表达阳性

7、反应物部位呈棕黄色。模型组APP的表达于6h明显升高〔(28.83±3.48)OD〕，与假手术组〔(24.05±2.86)OD〕比较差异有显著性意义(P0.05)，电针组APP表达〔(24.89±2.23)OD〕于6h较模型组明显降低(P0.05)，与假手术组比较无明显差异(P>0.05)。见图1。　　2.3免疫组化检测Tau1蛋白的结果大鼠造模后6h缺血区皮质脑区Tau1蛋白表达阳性反应物部位呈棕黄色，胞核呈蓝色。模型组Tau1蛋白的表达于6h明显升高〔(28.77±3.55)OD〕，与假手术组〔(23.43±2.37)OD〕比较差异有