氮源和碳源对冬凌草愈伤组织生长及迷迭香酸的积累的影响

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1、氮源和碳源对冬凌草愈伤组织生长及迷迭香酸的积累的影响：李汉伟，苏秀红，董诚明，王伟丽【摘要】目的研究碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长及其内迷迭香酸积累的影响。方法改变培养基中蔗糖浓度和碳源种类，考察不同碳源及其浓度对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响。在总氮源不变的情况下改变NO3-/NH4+的比例，考察不同NO3-/NH4+比例对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响。结果蔗糖是冬凌草愈伤组织培养中的最佳的碳源，其浓度为3%时，有利于冬凌草愈伤组织的生长和迷迭香酸的积累;NO3-/NH4+比例为1∶1时

2、，愈伤增值倍数最高；NO3-/NH4+比例2∶1时，迷迭香酸的积累量最大。结论实验确定了冬凌草愈伤组织培养的最佳碳源种类、浓度及氮源比例,表明不同碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长和次生代谢物合成有显著影响。【关键词】冬凌草；愈伤组织；碳源；氮源；迷迭香酸　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofcarbon,nitrogenongroarinicacidaccumulationofRabdosiarubescens(Henmsl.)Haracallus.Meth

3、odsThecallusgroarinicacidaccumulationanipulationofconcentrationsucrose,carbonandnitrogen.ResultsSucrosearinicacidaccumulation.30g/Lsucroseultiplicationandrosmarinicacidaccumulated.Themaximumcallusmultiplication,contentofaccumulatedrosmarinicacideleve

4、l.ConclusionVariouscarbon,nitrogenhavesignificanteffectsongroarinicacidaccumulationofRabdosiarubescens(Henmsl.)Haracallus.Thebestcarbonsourceanditsconcentration,nitrogensourcesforthegrosl.)Haracallusandthesynthesisofsecondarymetaboliteed.　　Keysl.)Har

5、a;callus;Carbon;Nitrogen;Rosmarinicacid　　冬凌草Rabdosiarubescens(Henmsl.)Hara为唇形科香茶菜属多年生植物,其入药部位是地上部分。近年来许多学者对冬凌草化学成分、药理作用及临床疗效进行了研究，发现其中的主要抗癌、抗菌活性成分为二萜类化合物（冬凌草甲素、冬凌草乙素）和多酚类化合物迷迭香酸，并对其作了较深入的研究［1,2］。国内学者在冬凌草组织培养方面也开展了相关工作［3～5］，但均不够系统和完善，且未对影响其愈伤培养物生长及其内次

6、生代谢产物积累的因素进行研究。迷迭香酸作为冬凌草水溶性部分中主要的有效成分，具有较好的抗菌、消炎、止痛的功效,为此，笔者在本实验室对冬凌草离体培养研究的基础上［6,7］，对影响其愈伤组织生长和代谢产物积累的碳、氮源种类及蔗糖浓度进行了研究，并考察了这些因素对其内主要次生代谢产物－迷迭香酸和冬凌草甲素的影响(因在整个愈伤组织培养过程中未检测到冬凌草甲素,故其积累规律在文中未进行探讨)，为进一步提高冬凌草培养物内有效成分产量、优化培养条件提供依据。　　1材料与方法　　1.1愈伤组织的获得　　以冬凌草

7、叶片作为外植体，在MS附加6-BA2.0mg/L，NAA1.0mg/L的培养基上诱导愈伤组织，将诱导出的愈伤组织在上述培养基上，经过3～4代的培养，形成质地较为均匀的愈伤组织。　　1.2蔗糖浓度处理　　将继代培养获得的愈伤组织接种到蔗糖浓度为1%，2%，3%，4%，5%的愈伤生长培养基上，每瓶4～6块愈伤组织，每个处理重复8次，并称取接种时的接种量，培养25d后，统计不同蔗糖浓度下愈伤组织的收获量，培养过程中观察愈伤组织的的生长情况。　　1.3碳源处理　　分别以蔗糖、葡萄糖、果糖为碳源，浓度为3

8、％。将继代培养获得的愈伤组织接种于附加6-BA2.0mg/L，NAA1.0mg/L的MS培养基，每瓶4～6块愈伤组织，每个处理重复8次，并称取接种时的接种量，培养25d后，称重不同碳源下愈伤组织的收获量，计算愈伤组织的增殖倍数，培养过程中观察愈伤组织在不同碳源上的生长情况。　　1.4氮源处理　　在总氮量不变的情况下，将继代培养获得的愈伤组织接种到改变NO3-/NH4+比例的MS培养基上。每瓶接种4～6块愈伤组织，每个处理重复8次，并称取接种时的接种量，培养25d后，统计不同氮源下愈伤组织的收获量