影响黄芪愈伤组织生长和黄芪黄酮合成的因素论文

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1、影响黄芪愈伤组织生长和黄芪黄酮合成的因素论文【摘要】目的研究培养基成分和光照对黄芪愈伤组织生长和黄酮类化合物形成的影响。方法使用不同培养基并改变其中碳源、氮源、磷酸盐、钙盐的浓度，在黑暗和光照条件下进行黄芪愈伤组织培养，分光光度法检测愈伤组织中黄酮类化合物的含量。结果黄芪黄酮积累的最佳条件是（24±1）℃暗培养，培养基为MS基本培养基（附加0.5mg·L-12,4-D和1.0mg·L-16-BA），其中含有80g·L-1蔗糖，NH+∶NO3-为1∶2（氮源总浓度为60mmol·L-1），1.5mmol·L-1KH2PO4，1.

2、496mmol·L-1CaCl2。结论蔗糖作为碳源最有利于黄芪愈伤组织生长和黄芪黄酮的生物合成。混合氮源有利于黄芪黄酮类化合物的合成。【关键词】膜荚黄芪；愈伤组织；黄芪黄酮；培养基成分Abstract：Objective：Tostudytheeffectsofcultureponentsandilluminationoncallusgroembranaceus(Fisch.)Bge.Methods：Adjustedtheconcentrationofcarbon,nitrogen,phosphateandcalciuminth

3、eculturesolution,andkepttheastragaluscallusunderdarkorillumination,thendetectedthecontentofflavonoidsbyspectrophotometry.Results：Theoptimumconditionoftotalflavonoidsofastragalusaccumulationediumg·L-12,4-Dand1.0mg·L-16-BA)mol·L-1KH2PO4and1.496mmol·L-1CaCl2,theproport

4、ionofNH+andNO3-mol·L-1）.Conclusion：Sucrose,selectedassourceofcarbonismorefavoredforthecallusgroaltoseare.Andmixednitrateisfavoredforthesynthesisofflavonoidspounds.Keyembranaceus(Fisch.)Bge.；Callus；Totalflavonoidsofastragalus；Culturebaseponent黄芪是豆科黄芪属植物.freelembranac

5、eus(Fisch.)Bge.和蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao是它的法定基原，为正品。研究表明黄酮是黄芪主要的活性成分之一，有广泛的药理作用，如清除自由基［2］、调节免疫、抗病毒、抑制血管内皮单层通透性增加等［3］。由于临床上对黄芪药材的需求量大增，黄芪野生资源破坏严重，产量日趋下降，有的产区种群已濒临灭绝［4］，而黄芪人工栽培存在生活周期长、存活率低、劳动强度大、农药残留超标、品质控制困难和有效成分较低等弊端，因此利用植物组织培

6、养技术进行黄芪次级代谢产物的生产是解决目前供需矛盾的有效途径之一。目前，对黄芪中黄酮类物质的研究主要集中在其药理作用上，对黄芩愈伤组织培养和黄酮类物质次生合成的研究尚少见报道。本文研究不同培养基成分对黄芪愈伤组织生长和黄酮类物质积累的影响，旨在为黄芪规模化生产黄酮类物质提供参考。1材料与方法1.1材料选用实验室盆栽膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的幼嫩叶片为外植体材料。1.2愈伤组织诱导与培养选取生长良好的黄芪植株，取幼嫩叶片，自来水冲洗干净，75%酒精消毒30s，再用0.1%HgC

7、l2溶液消毒7min，然后用无菌水冲洗4次，无菌滤纸吸干水分，切成0.5cm2的小块，接种在诱导培养基（MS/6,7-V+0.5mg·L-12,4-D+1.0mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8）上，(24±1)℃暗培养，大约3d时叶片边缘开始膨胀，第7天时边缘处长出愈伤组织，30d后挑选生长良好的愈伤组织，称重后继代培养，30d后收获称重。1.3黄芪愈伤组织测试指标干重增量=最终收获干重－接种干重量黄芪黄酮产量=干重增量×黄芪黄酮含量称量鲜重时，从培养容器中取出的黄芪愈伤组织，先用滤纸吸净其表面水分。测定

8、干重时，从培养容器中取出的黄芪愈伤组织置于50℃下干燥至恒重。实验重复3次取平均值。1.4黄芪黄酮含量测定1.4.1黄芪黄酮的提取［5］准确称取已粉碎的愈伤组织1.500g，加入20倍量的80%乙醇超声波（频率：40kHz，功率：500S培养基有利于愈伤组织的生长和黄芪黄酮的