正交法优化植物生长调节剂在黄芪愈伤组织生长中的应用

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1、正交法优化植物生长调节剂在黄芪愈伤组织生长中的应用：步营，陈显化，王子茜，张宗申【摘要】　　目的研究膜荚黄芪叶愈伤组织诱导、生长及黄芪多糖合成的最佳生长调节剂组合。方法以膜荚黄芪叶为外植体，运用正交设计研究6-BA、2,4-D和NAA等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导、培养及黄芪多糖合成的影响。结果分别以诱导率、相对生长速率和黄芪多糖含量为指标，结果表明NAA和6-BA对愈伤组织诱导率影响显著，6-BA、2,4-D和NAA都对愈伤组织的生长影响显著，2,4-D和NAA对黄芪多糖合成影响显著。结论诱导愈伤组织

2、的最佳培养基为：MS+2,4-D（0.5mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）；愈伤组织生长的最佳培养基为：MS+2,4-D（0.5mg·L-1）+6-BA（2.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）；促进黄芪多糖合成的最佳培养基为：MS+2,4-D（1.0mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（1.0mg·L-1）。【关键词】膜荚黄芪植物生长调节剂愈伤组织正交设计黄芪多糖　　Abstract：ObjectiveTostudytheoptimumbi

3、nationsofplantgrotheleavesofAstragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.MethodsTakingtheleavesofAstragalusMembranaceus(Fisch.)Bgeasexplants,threekindsofplantgroeters,includinginductionrate，relativegroatingtheefficiencyofthreeregulators,bothNAAand6-BAcouldinducecallusm

4、osteffectively,threeof6-BA,2,4-DandNAAallcouldaffectthegroarkably,andboth2,4-DandNAAcouldpromotethesynthesisofpolysaccharideseffectivelyasparedalculturemediumforcallusinductionis:MS+2,4-D（0.5mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）；Theoptimalculturemediumforca

5、llusgrog·L-1）+6-BA（2.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）;andtheoptimalculturemediumforthesynthesisofAstragaluspolysaccharidesis:MS+2,4-D（1.0mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（1.0mg·L-1）.　　Keyembranaceus(Fisch.)Bge.；Plantgroembranaceus(Fisch.)Bge.和蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fis

6、ch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao是它的法定基原，为正品。黄芪的药用成分主要是皂苷类、黄酮类和多糖等，在抗衰老、增强免疫力、强心降压等方面有重要的作用［2，3］。由于长期大量、无节制采挖和环境的污染，造成野生黄芪资源几近枯竭［4］；而人工栽培的药用黄芪，存在着劳动强度大、品质控制困难以及可耕地减少等限制因素。所以，利用生物技术大规模生产黄芪原材料，满足日益增长的医药市场需要，成为解决黄芪资源不足的重要途径之一。　　本文以膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fi

7、sch.)Bge.叶片为外植体，应用正交设计实验，研究6-BA，NAA和2,4-D对愈伤组织的诱导、生长和黄芪多糖合成的影响，以期筛选适宜的生长调节剂组合。　　1材料与方法　　1.1材料供试为盆栽膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的幼嫩叶片。　　1.2正交实验设计采用L9(34)正交设计，研究6-BA，NAA和2,4-D等3种植物生长调节剂对愈伤组织诱导和生长以及黄芪多糖合成的影响，因素水平见表1。采用MS基本培养基，其中含30g·L-1的蔗糖和8g·L-1的琼脂，pH

8、5.8。本文所有正交实验均用同一实验设计。实验结果用正交设计助手II专业版v3.1进行极差分析和方差分析。表1因素水平（略）　　1.3愈伤组织诱导与培养选取生长良好的黄芪植株，取幼嫩叶片，自来水冲洗干净，75%酒精消毒30s，0.1%HgCl2消毒7min，然后用无菌水冲洗4次，无菌滤纸吸干水分，切成0.5cm2的小块，接种在正交设计的9种培养基上培养，每种接5瓶，每瓶接5片。培养条件