t细胞激活剂对jurkat细胞重组激活基因表达的影响

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1、T细胞激活剂对Jurkat细胞重组激活基因表达的影响邹红云，马骊，姚新生，温茜，王小宁【关键词】T细胞激活剂,；Jurkat细胞；重组激活基因；逆转录聚合酶链反应【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofTcellactivatorsonthemRNAexpressionofrebinationactivatinggenes(RAGs)inJurkatcells.METHODS:AfterJurkatcellsg/L),antiCD3mAb(1∶100),PMA(40μg/L)+A23187(0.5μmol/L)for6a

2、nd12hrespectively,RAG1andRAG2mRNAeasuredbyRTPCR.SemiquantitativeanalysisRNAlevelsindifferentgroups.RESULTS:paredRNARNAlevelsenttime.RAG2mRNAlevelsinPHAtreatedgroupsRNARNAlevelAb(12h)treatedgroupthanthatincontrolgroups(P0.05).CONCLUSION：RAG1andRAG2mRNAaygiveacluethatJurkatcellsmaybe

3、provideanidealcelllinemodelforstudyingtheregulationofRAGsinperipheralTcells.【Keyerasechainreaction【摘要】目的：研究T细胞激活剂PHA，抗CD3mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因（RAGs）mRNA表达水平的影响.方法：采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA，以β肌动蛋白（βactin）的表达作为内参照进行灰度分析，比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平

4、.结果：三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组（P0.05），且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关；PHA刺激诱导后RAG2表达量显著低于对照组（P0.05）；PMA+A23187刺激诱导6,12h均未检测出RAG2mRNA的表达；而抗CD3mAb作用12h组RAG2mRNA表达量显著高于对照组（P0.05）.结论：Jurkat细胞同时表达RAG1,RAG2mRNA，并在一定诱导下RAGs表达量发生改变，因此有可能成为研究外周T细胞RAGs表达调节的一个潜在的细胞模型.【关键词】T细胞激活剂；Jurka

5、t细胞；重组激活基因；逆转录聚合酶链反应淋巴细胞特异性重组激活基因（rebinationactivatinggenes，RAG）1和RAG2是参与V(D)J重排和功能性抗原受体基因形成的一个首要条件〔1〕.一般认为，RAG1,RAG2基因仅特异性地同时表达于淋巴细胞发育的早期阶段，而不表达于淋巴细胞分化发育的较成熟阶段.然而，近年的研究发现，外周成熟淋巴细胞中也有RAGs表达和V(D)J重排的发生〔2-3〕.迄今，外周淋巴细胞RAGsmRNA的表达和调节机制仍不清楚.本研究以代表T细胞发育成熟阶段的人T细胞白血病细胞株Jurkat细胞为研究对象，检测其RAG

6、1和RAG2mRNA的共表达情况，探讨T细胞激活剂对Jurkat细胞RAGsmRNA表达水平的影响，为研究外周T细胞的RAGs表达调节机制奠定基础.1材料和方法1.1材料Jurkat细胞株购自上海细胞生物研究所（cloneE61,ATCCNumberTIB152,TCRαβ+CD3+CD4+CD8CD2+CD7+).分泌抗CD3mAb的杂交瘤细胞株12F6由南方医科大学分子免疫学研究所冻存.RPIM1640培养基（美国GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程公司）；植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA广东医药工业研究所产品）；佛波醇

7、12豆蔻酰13乙酸酯（Phorbol12Myristate13Acetate，PMA），钙离子载体A23187（美国Sigma公司）；总RNA提取试剂盒（安徽优晶生物工程有限公司）；RNA逆转录试剂盒（日本TOYOBO公司）；TaqDNA聚合酶（立陶宛MBIFermentas公司）；pUCmT载体（上海生工生物工程技术服务有限公司）；DL2000DNAMarker（TaKaRa大连宝生物有限公司）.1.2方法1.2.1细胞培养、处理及总RNA提取Jurkat细胞用含有100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃,50mL/LCO2条件下培养.将对数

8、生长期的Jurkat细胞，按1×109/L的密度培养