t细胞激活剂对jurkat 细胞重组激活基因表达的影响

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1、T细胞激活剂对Jurkat细胞重组激活基因表达的影响.L.编辑。作者:邹红云,马骊,姚新生,温茜,王小宁【关键词】T细胞激活剂,;Jurkat细胞;重组激活基因;逆转录聚合酶链反应【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofTcellactivatorsonthemRNAexpressionofrebinationactivatinggenes(RAGs)inJurkatcells.METHODS:AfterJurkatcellsg/L),antiCD3mAb(1∶100)

2、,PMA(40μg/L)+A23187(0.5μmol/L)for6and12hrespectively,RAG1andRAG2mRNAeasuredbyRTPCR.SemiquantitativeanalysisRNAlevelsindifferentgroups.RESULTS:paredRNARNAlevelsenttime.RAG2mRNAlevelsinPHAtreatedgroupsRNARNAlevelAb(12h)treatedgroupthanthatincontrolgroups(P&l

3、t;0.05).CONCLUSION:RAG1andRAG2mRNAaygiveacluethatJurkatcellsmaybeprovideanidealcelllinemodelforstudyingtheregulationofRAGsinperipheralTcells.【Keyerasechainreaction【摘要】目的:研究T细胞激活剂PHA,抗CD3mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同

4、T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平.结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组(P<0.05),且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关;PHA刺激诱导后RAG2表达量显著低于对照组(P<0.05);PMA+A23187刺激诱导6,12h均未检测出RAG2mRNA的表达;而抗CD3mAb作用12h

5、组RAG2mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05).结论:Jurkat细胞同时表达RAG1,RAG2mRNA,并在一定诱导下RAGs表达量发生改变,因此有可能成为研究外周T细胞RAGs表达调节的一个潜在的细胞模型.【关键词】T细胞激活剂;Jurkat细胞;重组激活基因;逆转录聚合酶链反应淋巴细胞特异性重组激活基因(rebinationactivatinggenes,RAG)1和RAG2是参与V(D)J重排和功能性抗原受体基因形成的一个首要条件[1].一般认为,RAG1,RAG2基因仅特异性地同时表

6、达于淋巴细胞发育的早期阶段,而不表达于淋巴细胞分化发育的较成熟阶段.然而,近年的研究发现,外周成熟淋巴细胞中也有RAGs表达和V(D)J重排的发生[2-3].迄今,外周淋巴细胞RAGsmRNA的表达和调节机制仍不清楚.本研究以代表T细胞发育成熟阶段的人T细胞白血病细胞株Jurkat细胞为研究对象,检测其RAG1和RAG2mRNA的共表达情况,探讨T细胞激活剂对Jurkat细胞RAGsmRNA表达水平的影响,为研究外周T细胞的RAGs表达调节机制奠定基础.1材料和方法1.1材料Jurkat细胞株购自上海细胞生

7、物研究所(cloneE61,ATCCNumberTIB152,TCRαβ+CD3+CD4+CD8CD2+CD7+).分泌抗CD3mAb的杂交瘤细胞株12F6由南方医科大学分子免疫学研究所冻存.RPIM1640培养基(美国GIBCO公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程公司);植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA广东医药工业研究所产品);佛波醇12豆蔻酰13乙酸酯(Phorbol12Myristate13Acetate,PMA),钙离子载体A23187(美国Sigma公司);总RNA提取试剂

8、盒(安徽优晶生物工程有限公司);RNA逆转录试剂盒(日本TOYOBO公司);TaqDNA聚合酶(立陶宛MBIFermentas公司);pUCmT载体(上海生工生物工程技术服务有限公司);DL2000DNAMarker(TaKaRa大连宝生物有限公司).1.2方法1.2.1细胞培养、处理及总RNA提取Jurkat细胞用含有100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃,50mL/LCO2条件下培养.将对数生

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